[发明专利]一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用，属于免疫学与兽药残留检测领域。该抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3依次为SEQ ID NO.6‑8所示的氨基酸序列；该抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3依次为SEQ ID NO.14‑16所示的氨基酸序列。本发明所获得的单克隆抗体具备高滴度、高灵敏性和高亲和力，同时采用该单抗制得的ELISA检测试剂盒及胶体金免疫层析试纸可快速、灵敏的检测人类组织或动物食品中莫西沙星残留，为国家兽药残留检测领域提供了技术支撑。

技术领域

本发明涉及免疫学与兽药残留检测领域，特别是涉及一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

氟喹诺酮类抗生素是市面上应用非常广泛的抗生素，被应用在人类与畜牧养殖中多种疾病的防治。由于药物的不规范使用，容易造成动物体内抗生素残留，进而通过食物链进入人类体内，给人类生命健康造成隐患。因此，我国农业农村部制定了一系列的抗生素残留国家限量标准，其中最新年度的兽药残留计划中对动物食品中氟喹诺酮类残留药物的最大残留限量的要求为10～500μg/kg。

莫西沙星属于第四代氟喹诺酮类抗生素，临床上主要应用于上呼吸道和下呼吸道感染。目前，根据国内外相关文献报道，检测莫西沙星的方法主要是基于荧光分析法、紫外分光光度计法、高效液相色谱法等理化分析法中延伸的各种方法。例如席会平等使用荧光分析法检测牛奶中的莫西沙星残留，其中莫西沙星检测浓度线性范围为50～400μg/L(r＝0.9991)，最低检测限为13.6μg/L；赵建晖等人提出了同时测定水产品中的加替沙星、莫西沙星和左氧氟沙星的超高效液相色谱-串联质谱分析方法，作者对3种化合物的质谱裂解规律进行了研究，研究发现当3种化合物的质量分数在100μg/kg以内呈线性，检出限(3S/N)在3.7～4.8μg/kg。Faezeh Mohaghegh等人在克雷茨曼构型(KC)中利用表面增强拉曼光谱(SERS)检测和定量低浓度的莫西沙星，该研究表明随着莫西沙星浓度的增加，拉曼谱线的峰值强度呈强烈的非线性变化，但在饱和效应开始的约100nM～1mM的浓度范围内有明确的定义。然而，这些方法大多需要繁琐的样品准备、昂贵的仪器设备和专业的技术人员，才能实现对待测样本的检测。

关于莫西沙星免疫学检测方法的建立，目前尚未有相关文献报道。因此，本发明将免疫学领域与兽药残留检测领域相结合，提供了一种快速、简便、灵敏的间接竞争ELISA方法来检测莫西沙星。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗莫西沙星单克隆抗体及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明获得一种高滴度、高灵敏性和高亲和力的抗莫西沙星单克隆抗体，基于该单抗研制的检测产品可快速、灵敏的检测人类组织或动物食品中莫西沙星残留，为国家兽药残留检测领域提供了技术支撑。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种抗莫西沙星单克隆抗体，所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区CDR-H1为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，CDR-H2为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，CDR-H3为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列；

所述抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区CDR-L1为SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，CDR-L2为SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列，CDR-L3为SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列。

进一步地，所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。

进一步地，编码所述抗莫西沙星单克隆抗体的重链可变区的核酸如SEQ ID NO.1所示，编码所述抗莫西沙星单克隆抗体的轻链可变区的核酸如SEQ ID NO.9所示。