[发明专利]缺失CPSⅡ和OMPDC基因的弓形虫减毒活疫苗在审
| 申请号： | 202211144733.3 | 申请日： | 2022-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN115926990A | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 卓洵辉;陆绍红;沈雨;丁建祖;丁豪杰;郑斌;童群波;金子;陈睿;楼涤 | 申请（专利权）人： | 杭州医学院 |
| 主分类号： | C12N1/11 | 分类号： | C12N1/11;C12N15/52;C12N15/60;C12N15/85;A61K39/002;A61P33/02;C12R1/90 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龙 |
| 地址： | 310013 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 缺失 cps ompdc 基因 弓形虫 减毒活 疫苗 | ||
1.一种弓形虫疫苗虫株，其特征在于，该弓形虫疫苗虫株同时缺失了氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ基因和乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶基因。
2.根据权利要求1所述弓形虫疫苗虫株，其特征在于，氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求1所述弓形虫疫苗虫株，其特征在于，基因敲除时使用的出发弓形虫为I型虫株。
4.根据权利要求3所述弓形虫疫苗虫株，其特征在于，基因敲除时使用的出发弓形虫为RH毒株。
5.权利要求1～4任一所述弓形虫疫苗虫株在制备弓形虫减毒活疫苗中的应用。
6.缺失CPSⅡ和OMPDC基因的弓形虫减毒活疫苗，其特征在于，包含权利要求1～4任一所述弓形虫疫苗虫株。
7.根据权利要求6所述缺失CPSⅡ和OMPDC基因的弓形虫减毒活疫苗，其特征在于，将基因敲除后的所述弓形虫疫苗虫株以无血清的DMEM溶液或者PBS作为溶剂制成弓形虫疫苗虫株的速殖子混悬液。
8.权利要求1～4任一所述弓形虫疫苗虫株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)出发弓形虫虫株具有氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ基因和乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶基因；
(2)通过同源重组的方法，经过药物筛选、PCR鉴定获得基因敲除了氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ基因和乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶基因的弓形虫疫苗虫株。
9.根据权利要求8所述弓形虫疫苗虫株的构建方法，其特征在于，所述弓形虫疫苗虫株在体外培养时，在培养基中加入尿嘧啶，与宿主细胞共同培养。
10.根据权利要求9所述弓形虫疫苗虫株的构建方法，其特征在于，宿主细胞为HFF人皮肤成纤维细胞。
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