[发明专利]结直肠癌甲基化基因标志物及其应用

说明书

本发明公开了结直肠癌甲基化基因标志物及其应用。所述基因标志物为FFAR2基因和/或Septin9基因。本发明通过对FFAR2和现有Septin9基因甲基化检测的研究，对这两种基因的引物和探针进行探索和优化，能够检测血浆样本中极低浓度的FFAR2和Septin9基因甲基化片段，提高对结肠直肠癌患者诊断的灵敏度，同时还具有高度的特异性。

技术领域

本发明属于结直肠癌检测技术领域，具体涉及一种结直肠癌甲基化基因标志物及其应用。

背景技术

结直肠癌(结肠直肠癌)是胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状，其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。结肠直肠癌多发生在中年以上的男性，以40-70岁最为多见，但20世纪末发现30岁以下者亦不少见。男女两性发病比例约为2:1。本病和其他恶性肿瘤一样，发病原因仍不清楚，可以发生在结肠或直肠的任何部位，但以直肠、乙状结肠最为多见，其余依次见于盲肠、升结肠、降结肠及横结肠。癌瘤大多数为腺癌，少数为鳞状上皮癌及粘液癌。本病可以通过淋巴、血液循环及直接蔓延等途径，播散到其他组织和脏器。根据临床表现、X射线钡剂灌肠或纤维结肠镜检查，可以确诊。治疗的关键在于早期发现、及时诊断和手术根治。

专利201810326484.7公开了Septin9及NDRG4基因甲基化的检测试剂盒和应用。该试剂盒包括有针对Septin9基因和NDRG4启动子基因的引物和探针，所述针对Septin9基因的引物和探针的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，以及SEQ ID NO：3所示，所述针对Septin9基因的引物和探针的序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，以及SEQ ID NO：6所示。发明人发现，NDRG4启动子基因的检测结果并不准确，且若启动子与taq酶结合的区域发生甲基化，存在漏检的可能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结直肠癌甲基化基因标志物及其应用。

一种结直肠癌甲基化基因标志物，所述基因标志物为FFAR2基因和/或Septin9基因。

一种FFAR2基因和/或Septin9基因甲基化的检测试剂盒，包括针对FFAR2基因和Septin9基因的引物和探针；所述针对FFAR2基因的引物和探针的序列如序列表SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；所述针对Septin9基因的引物和探针的序列如序列表SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。

所述试剂盒还包括针对内参基因GAPDH的引物和探针；所述针对FFAR2基因的引物和探针的序列如序列表SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示。

所述试剂盒还包括核酸提取试剂，所述核酸提取试剂包括核酸裂解吸附液、蛋白酶K溶液、磁珠、洗涤液、洗脱液。

所述核酸裂解吸附液由如下组分构成：2M盐酸胍、15％TritonX-100、30mM Tris-HCl、2％SDS、3M异硫氰酸胍、15％无水乙醇、15％异丙醇、35％甘油、纯化水。

所述蛋白酶K溶液由如下组分构成：30mg/ml蛋白酶K、50mM Tris-HCl、40mM氯化钾、50mM氯化钠、20mM氯化钙、15％TritonX-100、40％甘油、纯化水。

所述试剂盒还包括亚硫酸盐转化试剂；所述亚硫酸盐转化试剂包括转化液、结合液、脱磺液、磁珠、洗涤液、洗脱液。

所述转化液由如下组分构成：50％亚硫酸氢铵、15％亚硫酸铵、20％亚硫酸氢钠、4M氢氧化钠、纯化水。