[发明专利]一种用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒及其检测方法在审
申请号: | 202211081696.6 | 申请日: | 2022-09-06 |
公开(公告)号: | CN115786475A | 公开(公告)日: | 2023-03-14 |
发明(设计)人: | 孟春;洪晶;郭亮;马文晓;黄一玮;林晓蝶;谢李玲;王小亚;林齐心 | 申请(专利权)人: | 福州大学;福州迈新生物技术开发有限公司 |
主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 厦门原创联合知识产权代理有限公司 35293 | 代理人: | 黄伟敏 |
地址: | 350100 福建省*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 检测 卫星 不稳定性 试剂盒 及其 方法 | ||
本发明方案公开了一种用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒及其检测方法,检测试剂盒包括阴性质控品、多种qPCR反应液、qPCR预混液和无菌无酶水,其中,qPCR反应液包括6对分别扩增MSI突变位点的上游引物和下游引物,以及两个分别结合内参的参考探针和针对突变位点的检测探针,本方案通过扩增内参基因的参考探针与扩增突变位点的检测探针扩增的差异对微卫星不稳定性进行检测,该方案操作简便,无需正常组织作为对照,无需开盖,不容易产生气溶胶污染,节约样品,能够确保内参位点和检测位点扩增的一致性,除此之外,本方案对组织和ctDNA中的MSI都可以检测,其具有准确性和灵敏度高等优点。
技术领域
本发明涉及核酸检测技术领域,尤其涉及一种用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
微卫星序列是指核心序列为1~6个碱基的短串联重复结构,这些重复序列分布在整个人类基因组中。微卫星不稳定性(Microsatellite Instability,MSI)是由于DNA甲基化或基因突变致错配修复基因缺失,从而导致微卫星重复序列长度的改变,表现为同一微卫星位点在不同个体之间以及同一个体的正常组织与某些异常组织之间,微卫星位点的重复单位的数目不同,从而使其不能正常地发挥调控作用,导致细胞增殖及分化异常,促发恶性肿瘤形成。大量研究表明,MSI与结直肠癌、胃癌、子宫内膜癌等发生密切相关。
根据MSI的程度,目前可以将MSI分为微卫星高不稳定(MicroSatelliteInstability High,MSI-H),微卫星低不稳定(MicroSatellite Instability Low,MSI-L)以及微卫星稳定(MicroSatellite Stable,MSS)。由于MSI是一种多个相同碱基增加或缺失的比较特殊的突变类型,因此MSI的检测方法也比较复杂而且准确性也存在很大问题,目前MSI检测多需依赖正常组织作为对照,且在检测过程中还存在需要开盖,容易致使空气中气溶胶污染样品的情况,因此,如何提高检测操作便利性、结果参考性佳和检测灵敏度是非常具有积极现实意义的课题。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提出一种结果准确性高、检测灵敏度高且操作简便的用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒及其检测方法。
为了实现上述的技术目的,本发明所采用的技术方案为:
一种用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒,其包括阴性质控品、多种qPCR反应液、qPCR预混液和无菌无酶水,
其中,多种qPCR反应液分别一一对应用于检测微卫星位点NR-21、NR-24、NR-27、MONO-27、BAT-25、BAT-26。
作为一种可能的实施方式,进一步,本方案所述的多种qPCR反应液包括:
用于检测微卫星位点NR-21的qPCR反应液1,其具有SEQ ID No:1所示的正向引物,SEQ ID No:2所示的反向引物,SEQ ID No:3所示的参考探针,SEQ ID No:4所示的检测探针,其中,SEQ ID No:3的核苷酸序列的5’端有VIC标记,3’端有MGB标记,另外,SEQ ID No:4的核苷酸序列的5’端有FAM标记,3’端有MGB标记;
用于检测微卫星位点NR-24的qPCR反应液2,其具有SEQ ID No:5所示的正向引物,SEQ ID No:6所示的反向引物,SEQ ID No:7所示的参考探针,SEQ ID No:8所示的检测探针,其中,SEQ ID No:7的核苷酸序列的5’端有VIC标记,3’端有MGB标记,另外,SEQ ID No:8的核苷酸序列的5’端有FAM标记,3’端有MGB标记;
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