[发明专利]一种用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒，其特征在于，其包括阴性质控品、多种qPCR反应液、qPCR预混液和无菌无酶水，

其中，多种qPCR反应液分别一一对应用于检测微卫星位点NR-21、NR-24、NR-27、MONO-27、BAT-25、BAT-26。

2.如权利要求1所述的用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒，其特征在于，多种qPCR反应液包括：

用于检测微卫星位点NR-21的qPCR反应液1，其具有SEQ ID No：1所示的正向引物，SEQID No：2所示的反向引物，SEQ ID No：3所示的参考探针，SEQ ID No：4所示的检测探针；

用于检测微卫星位点NR-24的qPCR反应液2，其具有SEQ ID No：5所示的正向引物，SEQID No：6所示的反向引物，SEQ ID No：7所示的参考探针，SEQ ID No：8所示的检测探针；

用于检测微卫星位点NR-27的qPCR反应液3，其具有SEQ ID No：9所示的正向引物，SEQID No：10所示的反向引物，SEQ ID No：11所示的参考探针，SEQ ID No：12所示的检测探针；

用于检测微卫星位点MONO-27的qPCR反应液4，其具有SEQ ID No：13所示的正向引物，SEQ ID No：14所示的反向引物，SEQ ID No：15所示的参考探针，SEQ ID No：16所示的检测探针；

用于检测微卫星位点BAT-25的qPCR反应液5，其具有SEQ ID No：17所示的正向引物，SEQ ID No：18所示的反向引物，SEQ ID No：19所示的参考探针，SEQ ID No：20所示的检测探针；

用于检测微卫星位点BAT-26的qPCR反应液6，其具有SEQ ID No：21所示的正向引物，SEQ ID No：22所示的反向引物，SEQ ID No：23所示的参考探针，SEQ ID No：24所示的检测探针；

其中，SEQ ID No：3、SEQ ID No：7、SEQ ID No：11、SEQ ID No：15、SEQ ID No：19、SEQID No：23的核苷酸序列的5’端有VIC标记，3’端有MGB标记；

另外，SEQ ID No：4、SEQ ID No：8、SEQ ID No：12、SEQ ID No：16、SEQ ID No：20、SEQID No：24的核苷酸序列的5’端有FAM标记，3’端有MGB标记。

3.如权利要求2所述的用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品为细胞系SW480基因组DNA溶液，其浓度为10ng/μl；

所述qPCR预混液为Premix Ex Taq，其包括Taq HS、dNTP Mixture、Mg²⁺和Tli RNaseH；

所述多种qPCR反应液中的正向引物、反向引物、参考探针和检测探针的浓度均为10μM。

4.一种非治疗目的的用于检测微卫星不稳定性的方法，其特征在于，其包括权利要求1至3之一所述的用于检测微卫星不稳定性的检测试剂盒，所述使用方法包括：

S01、取所述检测试剂盒的各组分，按预设条件对其进行混合处理后，配制成具有检测位点样品和阴性对照品的多个qPCR反应体系混合液；

S02、按预设条件进行qPCR扩增反应，在反应结束后，对多个qPCR反应体系混合液进行表征获得VIC、FAM荧光信号的Ct值；对样品同一检测位点的FAM和VIC信号的Ct值求差值ΔCt；

S03、将样品检测位点的ΔCt值与阴性对照品该位点的ΔCt值进行差值求取，即：

ΔCt＝|Ct_FAM-Ct_VIC|；

ΔΔCt＝|ΔCt_样品-ΔCt_阴性|；

S04、获取ΔΔCt且按预设条件对其进行判断，且根据判断结果输出样品检测结果为微卫星不稳定性MSI或微卫星稳定性MSS。