[发明专利]抗PD-L1抗体、其制备方法和应用

权利要求书

1.抗PD-L1抗体，其特征在于，

所述抗体由重链和轻链构成；

所述重链包括以下至少一种：

第一重链（4D11_huVH4），其氨基酸序列与SEQ ID NO：1具有85～100 %的同一性；

第二重链（4D11_huVH5），其氨基酸序列与SEQ ID NO：2具有85～100 %的同一性；

第三重链（4D11_huVH6），其氨基酸序列与SEQ ID NO：3具有85～100 %的同一性；

所述轻链包括以下至少一种：

第一轻链（4D11_huVL3），其氨基酸序列与SEQ ID NO：4具有85～100 %的同一性；

第二轻链（4D11_huVL4），其氨基酸序列与SEQ ID NO：5具有85～100 %的同一性。

2.根据权利要求1所述的抗PD-L1抗体，其特征在于，

所述4D11_huVH4的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述4D11_huVH5的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述4D11_huVH6的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述4D11_huVL3的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述4D11_huVL4的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

3.根据权利要求1或2所述的PD-L1抗体，其特征在于，

所述抗体为人源化抗体。

4.抗PD-L1抗体的制备方法，其特征在于，

所述方法包括：

1）构建非人源性杂交瘤细胞，从中纯化得到RNA，以纯化后的RNA逆转录为cDNA作为模板后采用特异性PCR引物对目的片段进行体外扩增，将阳性PCR产物连接T载体进行质粒的重组和转化，通过蓝白斑筛选以及PCR验证，选择阳性PCR产物克隆并测序，得到非人源性抗体原始序列；

2）人源性序列构建：基于步骤1）所得的非人源性抗体原始序列，建模并经过数据库对比，将非人源性抗体原始序列突变为人源化序列；

3）抗体构建：将步骤2）所得的人源化序列组合成人源化抗体；

4）抗体表达：于Expi293哺乳动物表达系统中进行步骤3）所得人源化抗体的表达；

5）抗体纯化：收取经步骤4）于Expi293细胞表达后的细胞上清液，纯化至抗体纯度≥90%。

5.根据权利要求4所述的抗PD-L1抗体的制备方法，其特征在于，

步骤1）所述非人源性杂交瘤细胞由以下方法培养得到：

1-1）利用PD-L1-his抗原对小鼠进行靶蛋白免疫注射，使小鼠体内产生能分泌特异性靶蛋白抗体的B细胞；

1-2）取产生免疫反应的小鼠脾脏细胞进行细胞融合，得到融合细胞；

1-3）所得融合细胞经ELISA法检测筛选并选取能够与PD1-hFc竞争结合PD-L1-his的融合细胞进行亚克隆，亚克隆后再次经过ELISA法检测筛选并选取能够与PD1-hFc竞争结合PD-L1-his的融合细胞进行建株，得到非人源性杂交瘤细胞。

6.根据权利要求4所述的抗PD-L1抗体的制备方法，其特征在于，

步骤1）非人源性抗体原始序列包括：

重链核酸序列、轻链核酸序列、重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的抗PD-L1抗体的制备方法，其特征在于，

所述重链核酸序列如SEQ ID NO：6所示；

所述轻链核酸序列如SEQ ID NO：7所示；

所述重链氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；

所述轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。

8.根据权利要求4所述的抗PD-L1抗体的制备方法，其特征在于，

步骤2）所述人源化序列包括人源性重链序列和人源性轻链序列。