[发明专利]GST基因及其siRNA结合不同生防菌在白蚁防治中的应用

说明书

本发明公开了一种黑胸散白蚁GST基因及其siRNA结合不同生防菌（金龟子绿僵菌或球孢白僵菌）在白蚁防治中的应用，GST siRNA来源于黑胸散白蚁GST基因，即谷胱甘肽S转移酶基因。克隆目的基因GST的片段，序列为SEQ 1。设计并克隆GST dsRNA模板，通过T7体外转录系统合成GST dsRNA。随后利用RNase III将GST dsRNA消化成作用效果更强的GST siRNA。将GST siRNA与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食。取食GST siRNA的白蚁体内GST基因表达量显著下降。用金龟子绿僵菌感染取食GST siRNA的白蚁后，染菌白蚁死亡率显著升高；用球孢白僵菌感染取食GST siRNA的白蚁后，染菌白蚁死亡率显著升高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及 GST基因和 GST siRNA，一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸 GST siRNA。

背景技术

白蚁是一种在全球范围内普遍存在的有害生物，特别是在热带和亚热带地区。其群居的生活方式对房屋、水库、堤坝、山区、农村、通讯设备等造成了不可逆的危害，而且这种危害具有很强的隐蔽性和严重性。在我国，除新疆、青海、宁夏、内蒙古和黑龙江等少数省（区）外，其余各省（区）均有白蚁分布。目前，化学防治方法是白蚁防治的主要手段。然而，许多高效但高毒高污染的化学药剂已被禁用，如氯丹和灭蚁灵。因此，基于对环境、人畜安全的考虑，如何绿色防控白蚁是目前研究者亟待解决的关键问题之一。

害虫生物防治是指利用有益生物及其产物控制有害生物种群数量的防治技术，是目前最成功、最经济、最安全的一种绿色防控技术。在自然界，由真菌致死的昆虫约占全部病原微生物致病导致死亡的60%。目前已经在生产上得到应用的主要有绿僵菌、白僵菌、拟青霉、莱氏野村菌等。例如，金龟子绿僵菌属于子囊菌亚门、核菌纲、球壳菌目、麦角菌科、绿僵菌属，其生物制剂能够防治200多种农业害虫，并且能够与植物根部形成根际共生关系，从而持续防治有害昆虫。另一种完全不同的虫生真菌，球孢白僵菌属于盘菌亚门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草菌科、白僵菌属，能够侵入6个目15科200多种昆虫和螨类，在世界上应用最为广泛。因此，生防菌在持续绿色防控有害昆虫方面发挥了重要作用。然而，利用生防菌防治野外白蚁巢群的效果很不理想。这是由于白蚁属于社会性昆虫，其巢内成员利用行为免疫和生理免疫，相互协作，共同抵御病原真菌的侵染。因此，如何削弱白蚁疾病防御力是提高生防菌杀灭白蚁效果的关键。