[发明专利]GST基因及其siRNA结合不同生防菌在白蚁防治中的应用

权利要求书

1.黑胸散白蚁GST基因，其特征在于，DNA序列为SEQ ID NO: 1。

2.一种小分子双链核酸GST siRNA，其特征在于，采用含权利要求1所述的黑胸散白蚁GST基因片段的质粒作为模板，上游引物为SEQ ID NO: 5，下游引物为SEQ ID NO: 6，经PCR扩增，酚/氯仿/异戊醇试剂提纯，醋酸钠结合无水乙醇浓缩的方法获得GST dsRNA模板，GSTdsRNA模板的DNA序列为SEQ ID NO: 4；

GST dsRNA模板通过T7体外转录系统合成，酚/氯仿试剂提纯，醋酸钠结合无水乙醇浓缩的方法获得双链核酸GST dsRNA，RNA序列为SEQ ID NO: 7；

双链核酸GST dsRNA通过RNase III消化获得小分子双链核酸GST siRNA。

3.根据权利要求2所述的小分子双链核酸GST siRNA，其特征在于，黑胸散白蚁GST基因片段的质粒是以黑胸散白蚁GST基因为模板，经上游引物SEQ 2和下游引物SEQ ID NO: 3，通过PCR扩增、TA克隆、摇菌检测、质粒提取的方法获得。

4.一种含小分子双链核酸GST siRNA的防治白蚁的产品，所述的小分子双链核酸GSTsiRNA为权利要求2-3任一项所述的小分子双链核酸GST siRNA。

5.一种含权利要求4所述的小分子双链核酸GST siRNA为活性成分的防治白蚁的产品。

6.权利要求5所述的产品，其特征在于，双链核酸GST siRNA协同生防真菌制备得到的防治白蚁的产品，所述的生防菌包括金龟子绿僵菌、黄绿绿僵菌、蝗绿僵菌及其近缘绿僵菌和球孢白僵菌、小球孢白僵菌、布氏白僵菌及其近缘白僵菌。

7.一种防治白蚁的方法，包含权利要求4-6任一项所述的小分子双链核酸GST siRNA，其特征在于，步骤如下：

（1）将小分子双链核酸GST siRNA与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，得到取食GST siRNA的白蚁；

（2）将小分子双链核酸GST siRNA先与纳米颗粒混合形成GST siRNA纳米复合体，再与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，得到取食GST siRNA纳米复合体的白蚁；

（3）利用质量浓度是0.1-2 % Tween 80溶液收集生防菌孢子，制备生防真菌孢子悬浮液；

（4）利用生防真菌孢子悬浮液感染取食GST siRNA或GST siRNA纳米复合体的白蚁，进而防治白蚁。

8.根据权利要求7所述的防治白蚁的方法，其特征在于，白蚁食物包括纸片、木块、木屑、或木粉的含纤维素的物质，GST siRNA或GST siRNA纳米复合体与白蚁食物混合方式为浸润、涂抹、或注入的混合方法。