[发明专利]米尔伊丽莎白菌的检测引物组合物及检测方法在审
| 申请号： | 202211014380.5 | 申请日： | 2022-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN115710604A | 公开（公告）日： | 2023-02-24 |
| 发明（设计）人： | 李伟;向圣汉;孙文秀;李俊慧 | 申请（专利权）人： | 长江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 张杰 |
| 地址： | 434023*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 米尔 伊丽莎白 检测 引物 组合 方法 | ||
1.一种米尔伊丽莎白菌的检测引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括以下三对引物中的至少一对：
EM02F：5’-GCTTCCGCTTCTGATAATTGAC-3’，
EM02R：5’-GGAGACGAGCTATTAGTGTATCG-3’；
EM03cF：5’-AACTACTGTCACTAATC-3’，
EM03cR：5’-GAATTGTTAGCTGTTGAA-3’；
EM04cF：5’-CCAGTTTTTAGAGTTGAAAT-3’，
EM04cR：5’-GACATACACATACTTTGT-3’。
2.根据权利要求1所述米尔伊丽莎白菌的检测引物组合物，其特征在于，所述引物组合物中包括所述的三对引物。
3.根据权利要求1所述米尔伊丽莎白菌的检测引物组合物，其特征在于，所述三对引物的摩尔比为1:1:1。
4.一种米尔伊丽莎白菌的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物组合物。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，包括用于PCR扩增的试剂。
6.一种非疾病诊断和治疗为目的的米尔伊丽莎白菌检测方法，其特征在于，提取待测样品的DNA，并以其为模板采用权利要求1所述的引物组合物进行扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
7.根据权利要求6所述的米尔伊丽莎白菌检测方法，其特征在于，所述扩增的反应体系为：共30μL，2×Taq PCR Master Mix 15μL，模板DNA 2μL，每条引物的终浓度为1μmol/L，ddH2O余量。
8.根据权利要求6所述的米尔伊丽莎白菌检测方法，其特征在于，所述扩增的反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，47℃退火30s，72℃延伸1min 30s，扩增34个循环；72℃延伸10min。
9.根据权利要求6所述的米尔伊丽莎白菌检测方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳检测得到的特异性片段大小具体为：引物对EM02F/R扩增的片段长度为473bp，引物对EM03cF/R扩增的片段长度为870bp，引物对EM04cF/R扩增的片段长度为617bp。
10.根据权利要求6所述的米尔伊丽莎白菌检测方法，其特征在于，所述扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶电泳上进行电泳检测。
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