[发明专利]间皮素特异性外泌体载体、包含其的载药外泌体、其制备方法及其医药用途

说明书

本发明提供了一种外泌体载体，其包含间皮素(MSLN)特异性嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体包括跨膜部分和展示于外泌体膜表面的抗MSLN单链抗体，所述跨膜部分为人CD63。本发明还提供了包含该外泌体载体的载药外泌体、药物组合物及其医药用途。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种间皮素特异性外泌体载体、包含其的载药外泌体、其制备方法及其医药用途。

背景技术

为解决常规给药药物利用率低的特点，近年来，纳米技术包纳药物的研究十分火热，并在药物缓释及递送方面已取得较好的研究成果。但由于纳米颗粒为外源性物质，具有免疫原性，无法逃避体内巨噬细胞的吞噬作用，因此体内循环稳定性差，利用度低，甚至可能造成机体排异损伤，影响其最终的治疗效果。外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小均一、直径在30-150nm之间的小囊泡。外泌体可以携带多种蛋白质、mRNA、miRNA，参与细胞之间的信号传导与交流。所有人体细胞都能分泌，其可携带不同的蛋白质和核酸，起着细胞间通讯的作用。外泌体作为自身细胞分泌物，生物稳定性好，渗透性强，是一种理想的药物递送载体。故可利用外泌体作为载药系统，能最大限度地发挥其治疗作用。

实际上，探讨外泌体作为载体的研究已经越来越多。Dai,S.报道了通过基因工程使人结肠癌细胞LS-174T所分泌的外泌体内含有大量IL-18，可以有效的促进T细胞增殖以及IFN-γ释放，从而达到杀伤抑制肿瘤细胞的目的。当外泌体中高表达miR-122、miR-134、miR146b或是anti-miR-9等时，均可在抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡或者是增强药物敏感性等方面发挥抗肿瘤的作用。2015年Yang，T报道了当用脑内皮细胞分泌的外泌体包裹化疗药物阿霉素和紫杉醇后，可以使药物通过血脑屏障，该发现对基于外泌体的治疗研究意义重大，提示外泌体作为药物运输载体具有非常大的应用潜能。2016年，Kim,M.S等人发表于nanomedicine上的文章显示应用巨噬细胞细胞系Raw264.7所分泌的外泌体包裹紫杉醇可以有效的杀伤多药耐药的肿瘤细胞，该研究证实了以外泌体作为化疗药物的运输载体的高效性。除此之外，Toffoli的研究证明当用外泌体包裹阿霉素的时候，可以有效的降低阿霉素的心脏毒性。但是单纯使用外泌体作为运药载体并无肿瘤细胞靶向性的作用，因此无法实现药物在肿瘤部位的富集。

卵巢癌是妇科癌症最为常见的一种恶性肿瘤,由于其发病隐匿，临床症状、体征不典型且缺乏有效的早期诊断方法，故80％的卵巢癌患者在确诊时已属晚期，晚期卵巢癌5年生存率不到30％。目前卵巢癌的主要治疗策略以减瘤术联合化疗为主，主要以紫杉醇联合卡铂进行化疗，但是传统化疗药物无法直接靶向肿瘤细胞，只能进行无选择性的细胞杀伤，在杀死肿瘤细胞的同时也会杀死正常的细胞，使身体的免疫力低下。同时化疗治疗的患者绝大部分会出现恶心、呕吐、便秘、腹泻等胃肠道反应症状。因此寻找一种可精准杀伤肿瘤细胞的同时能够降低患者胃肠道反应，提高患者生活质量的治疗方法就显得至关重要。

间皮素(MSLN)是一种在分离单克隆抗体K1(MabK)时发现的细胞表面表达的糖蛋白，其仅在体腔的间皮细胞中表达，在恶性间皮瘤、卵巢恶性肿瘤、胰腺癌中呈现高度表达。MSLN基因是卵巢癌患者体内表达上调最显著的基因之一。目前的研究显示，MSLN可作为卵巢癌的肿瘤标志物及其预后预测指标。

蛇床子素又名甲氧基欧芹酚或欧芹酚甲醚，是从伞形科植物中提取分离的纯天然香豆素类化合物。研究表明蛇床子素具有抗肿瘤、抗骨质疏松、抗肝炎、抗变态反应、抑制血小板聚集，以及抗病毒、抗诱变等多种药理活性。

发明内容

本公开提供了一种外泌体载体，其包含间皮素(MSLN)特异性嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体包括跨膜部分和展示于外泌体膜表面的抗MSLN单链抗体，所述跨膜部分为人CD63。

在一些实施方案中，所述人CD63的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。