[发明专利]一种基于微液滴的实时数字化LAMP核酸检测方法

权利要求书

1.基于微液滴的实时数字化LAMP核酸检测方法，包括以下步骤：

1)将油相和LAMP反应溶液于微通道中混合后，切割成若干油包水的微液滴；所述LAMP反应溶液包括LAMP检测用试剂与待检样品；

2)将所述微液滴平铺成单层后，进行LAMP反应，实时监测微液滴荧光信号，统计有荧光的微液滴的比例；通过有荧光微液滴的比例，定量推算出目标微生物核酸分子的拷贝数。

2.根据权利要求1所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述LAMP检测用试剂包括针对新型冠状病毒核酸基因组的保守片段的引物。

3.根据权利要求2所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述新型冠状病毒核酸基因组的保守片段包括新型冠状病毒E基因。

4.根据权利要求3所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述LAMP检测用试剂包括用于扩增新型冠状病毒E基因的引物组；所述引物组包括F3、B3、FIP、BIP、LF和LB；所述F3、B3、FIP、BIP、LF和LB的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述LAMP检测用试剂还包括DNA染料、脱氧尿苷5'-三磷酸、尿嘧啶-DNA糖基化酶、磷盐酸盐和蛋白变性剂。

6.根据权利要求5所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述DNA染料包括SYTO 82、Cyber Green或Ever Green。

7.根据权利要求1所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述油相为HFE7500或FC40。

8.根据权利要求1所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述平铺为将所述微液滴平铺于可封闭的玻璃腔室中；所述微液滴的直径等于所述玻璃腔室的空腔高度；

对所述微液滴进行LAMP反应包括对所述玻璃腔室加热至LAMP反应所需的温度后保温，触发LAMP反应。

9.根据权利要求1所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述微液滴的直径为100～2000μm。

10.根据权利要求1所述的实时数字化LAMP核酸检测方法，其特征在于，所述实时监测微液滴荧光信号包括：采用imageJ对微液滴进行实时追踪，量化微液滴中的荧光信号随时间的变化。