[发明专利]一种抑制潜在致病菌的植物甾醇复合制剂及其应用

说明书

本发明公开了一种抑制潜在致病菌的植物甾醇复合制剂及其应用。所述植物甾醇复合制剂是以植物甾醇和内切葡聚糖酶酶液1:1～3的体积比制备得到的，其中内切葡聚糖酶酶液是由氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的内切葡聚糖酶突变体TrepCel3‑Aa制备得到的。所述植物甾醇复合制剂的制备工艺简单，经实验证实，其具有明显的抑制动物体内潜在致病菌的作用，例如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌，且是通过抑制潜在致病菌菌膜形成达到抑菌作用的，而且其还能够有效减少毒力因子弹性蛋白酶、绿脓菌素、胞外多糖和Swarming的含量，进而促进动物的肠道健康，有助于动物的生长。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种抑制潜在致病菌的植物甾醇复合制剂及其应用。

背景技术

植物固醇，是以游离状态或与脂肪酸和糖等结合的状态存在的一种功能性成分，广泛存在于蔬菜、水果等各种植物的细胞膜中，其对人体健康有很多益处，有防治前列腺肥大、抑制肿瘤、抑制乳腺增生和调节免疫等作用，还可以与胆固醇竞争，减少胆固醇吸收。植物甾醇也是一种抑菌剂，通过改变细胞通透性发挥抑制某些细菌的生长。

随着宏基因组筛选方法的广泛运用，目前已有多种内切葡聚糖酶从草食动物的瘤胃中获得，如驼鹿、绵羊、水牛、奶牛和骆驼。但是大部分候选纤维素酶没有被克隆和表征。内切葡聚糖酶通过底物结合口袋与底物锚定，进一步被活性催化位点催化。因此，挖掘瘤胃微生物宏基因组中内切葡聚糖酶可以为内切葡聚糖酶的开发提供新的研究思路，同时对底物结合口袋进行适当的定点突变，提高酶与底物结合稳定性。

动物体内存在一些潜在致病菌，能够影响其肠道健康，进而导致动物的生长受阻，不利于畜牧业的发展。而抗生素的使用也使动物体内的致病菌产生抗药性，因此，能够抑制潜在致病菌、保障动物肠道健康，并长久使用的制剂对畜牧业的发展具有重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种抑制潜在致病菌的植物甾醇复合制剂及其应用。所述植物甾醇复合制剂具有很好的潜在致病菌抑制作用，能够保障动物肠道健康。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种抑制潜在致病菌的植物甾醇复合制剂，所述植物甾醇复合制剂中含有植物甾醇和内切葡聚糖酶酶液。

进一步的，所述植物甾醇和内切葡聚糖酶酶液的体积比为1:1～3。

进一步的，所述内切葡聚糖酶酶液是由氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的内切葡聚糖酶突变体TrepCel3-Aa制备得到的。

进一步的，所述内切葡聚糖酶突变体TrepCel3-Aa是由氨基酸序列为SEQ ID No.1的内切葡聚糖酶的第124位的缬氨酸突变为色氨酸以及第128位的丝氨酸突变为酪氨酸获得的。

进一步的，所述内切葡聚糖酶酶液的酶活不低于500U/mL。

本发明还提供了所述的植物甾醇复合制剂在制备潜在致病菌的抑菌剂中的应用。

进一步的，所述植物甾醇复合制剂的使用浓度不低于10ug/ml。

进一步的，所述潜在致病菌包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌。

进一步的，所述植物甾醇复合制剂能够有效减少潜在致病菌的毒力因子弹性蛋白酶、绿脓菌素、胞外多糖和Swarming的含量。

进一步的，所述植物甾醇复合制剂能够有效抑制潜在致病菌菌膜形成。

与现有技术相比，本发明的优点和有益技术效果是：

1、本发明对内切葡聚糖酶的底物结合口袋中的活性位点进行定点突变，将得到内切葡聚糖酶突变体TrepCel3-Aa在大肠杆菌中成功表达，并将其纯化得到的突变体酶液与植物甾醇复配，得到植物甾醇复合制剂。