[发明专利]检测和鉴别哈维氏弧菌的引物及其应用在审
| 申请号： | 202210982078.2 | 申请日： | 2022-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN115927676A | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 龙昊;任伟;薛冰青;谢珍玉;章翔;蔡晓霓;黄爱优;曾艳华 | 申请（专利权）人： | 海南大学;海南大学三亚研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/63 |
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| 地址： | 570228 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 鉴别 哈维 弧菌 引物 及其 应用 | ||
1.鉴别哈维氏弧菌的引物对，其上游引物的核酸如SEQ ID NO:1所示，其下游引物的核酸如SEQ ID NO:2。
2.试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对和扩增试剂。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的扩增试剂包括MgCl2、KCl、dNTP和Taq DNA Polymerase。
4.权利要求1所述的引物对，和/或权利要求2所述的试剂盒在检测和鉴别哈维氏弧菌中的应用。
5.非诊断目的的鉴别哈维氏弧菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以DNA样品作为扩增模板，使用权利要求1所述引物对或权利要求2所述的试剂盒进行PCR扩增；
(2)检测扩增产物，根据样品扩增情况判断样品中是否含有哈维氏弧菌。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述DNA样品包括DNA纯化物、含有DNA的粗提物或菌悬液。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括：DNA模板2.0～4.0μL，chiA-F 10pmol/L，chiA-R 10pmol/L，MgCl2 1.5mmol/L，KCl 50mmol/L，dNTP 250μmol/L，AceTaq DNA Polymerase 0.2U/mL、ddH2O。
8.根据权利5要求所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：94℃预变性5min；94℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸1min；上述步骤循环30次；72℃延伸10min；4℃保存。
9.根据权利要求5所述的检测方法，所述的判断的方法包括：若扩增出129bp的DNA片段，则样品含有哈维氏弧菌，否则，样品中不含哈维氏弧菌。
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