[发明专利]缬氨酸脱氢酶及其突变体在制备手性L-氨基酸中的应用

权利要求书

1.一种缬氨酸脱氢酶，其特征在于，所述缬氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一种缬氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体是由SEQ ID NO.3所示缬氨酸脱氢酶氨基酸序列的第294位异亮氨酸定点突变为缬氨酸或丙氨酸得到。

3.权利要求1所述缬氨酸脱氢酶或权利要求2所述缬氨酸脱氢酶突变体在制备手性L-氨基酸中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述手性L-氨基酸为L-2-氨基丁酸、L-叔亮氨酸或L-苯甘氨酸。

5.一种制备手性L-氨基酸的方法，其特征在于，所述方法为：制备权利要求1所述缬氨酸脱氢酶或权利要求2所述缬氨酸脱氢酶突变体的酶液，将制备所得酶液或将能表达权利要求1所述缬氨酸脱氢酶或权利要求2所述缬氨酸脱氢酶突变体的转基因工程菌细胞加入含有α-酮酸底物、氨基供体及辅酶再生系统的混合体系中进行还原胺化反应，制得手性L-氨基酸。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述酶液为能表达权利要求1所述缬氨酸脱氢酶或权利要求2所述缬氨酸脱氢酶突变体的基因工程菌的破胞粗酶液或纯化后的酶液。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述α-酮酸底物为2-丁酮酸、3,3-二甲基-2-氧代丁酸、苯乙酮酸或其各自的盐形式化合物。

8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述手性L-氨基酸为L-2-氨基丁酸、L-叔亮氨酸或L-苯甘氨酸。

9.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述辅酶再生系统为以甲酸脱氢酶为辅酶再生酶，以甲酸铵为辅酶再生底物，包含NADH和NAD⁺的甲酸脱氢酶辅酶再生系统；或为以葡萄糖脱氢酶为辅酶再生酶，以葡萄糖为辅酶再生底物，包含NADH和NAD⁺的葡萄糖脱氢酶辅酶再生系统；或以醇脱氢酶为辅酶再生酶，以异丙醇为辅酶再生底物，包含NADH和NAD⁺的醇脱氢酶辅酶再生系统。

10.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述还原胺化反应的底物浓度为0.2M～0.4M。