[发明专利]一种用于检测斯克里布纳短体线虫的RPA引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测斯克里布纳短体线虫的RPA引物，其特征在于：所述RPA引物的核苷酸序列如下：

Ps-RPAF1：5′-TGACAAGTGAAAAATTCTAGTCTTATCG-3′，SEQ ID NO.1；

Ps-RPAR1：5′-CTACGACTATAATTTAGTAATCCCAAT-3′，SEQ ID NO.2。

2.一种基于权利要求1所述引物的试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒组分包括：Rehydrationbuffer、MgOAc、Positive controlprimermix、Positive control DNAtemplate和RPA冻干酶粉。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，反应体系如下：

Rehydrationbuffer 29.5μL，ddH₂O 11.2μL，280mM的MgOAc 2.5μL，10μM的上游引物和下游引物各2.4μL，DNA模板2μL，RPA冻干酶粉5mg。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，反应条件如下：42℃金属浴中5min，取出进行多次颠倒离心充分混匀，再于42℃金属浴中15min，随后在冰上结束反应。

6.权利要求1所述的引物在制备检测斯克里布纳短体线虫试剂盒的应用。

7.权利要求1所述的引物或权利要求2～5任一所述的试剂盒在检测斯克里布纳短体线虫上的应用。

8.基于权利要求5所述试剂盒快速检测斯克里布纳短体线虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的DNA；

(2)以步骤(1)所提取的DNA作为RPA反应的模板，采用引物，进行RPA反应扩增，获得RPA反应产物；

(3)对步骤(2)获得的RPA反应产物进行纯化，用琼脂糖凝胶电泳进行产物分析。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述分析的标准：若在329bp处出现扩增条带则为斯克里布纳短体线虫。