[发明专利]一种耐高温蛋白酶AbTp及其应用

说明书

本发明涉及生物技术及应用领域，具体涉及一种耐高温蛋白酶AbTp及其应用。所述蛋白酶AbTp至少包含氨基酸片段TNNHVVEGA、PFTDLAVIRAE和GGALVNAAGQVI的一种或多种。本发明所提供的耐高温的蛋白酶AbTp，其最适温度为70℃，最适pH 6.0，在70℃下的半衰期可达267分钟，比活力可达1877 U·mgsupgt;‑1/supgt;。将蛋白酶AbTp应用于虾壳蛋白质的降解中，蛋白降解率可达61%，高于以往生物降解法中通常采用的猪来源胰蛋白酶和猪来源胃蛋白酶。

技术领域

本发明涉及生物技术及应用领域，涉及一种耐高温蛋白酶AbTp及其应用。

背景技术

虾壳的主要成分是碳酸钙、蛋白质和几丁质。其中，蛋白质含量占20％～40％，通过蛋白酶水解虾壳蛋白质获得多肽和氨基酸，可作为饲料和植物营养液。

传统的蛋白酶主要从动物内脏中获得，但是受到动物的生长周期、来源与酶的特性等条件的限制：动物来源的蛋白酶，首先需要将新鲜动物胰脏的脂肪和结缔组织剥去，捣碎后过滤，用硫酸铵沉淀得到蛋白酶原的粗品，经胰蛋白酶激活后得到蛋白酶粗品。这种动物来源的蛋白酶纯度不高且蛋白酶的产量较少。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于，提供一种耐高温蛋白酶及其应用。本发明的蛋白酶通过基因工程的方式在大肠杆菌中的大量表达，且生长周期短，更适合作在工业中应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

蛋白酶AbTp来源于高温期堆肥宏转录组数据库。该数据库属于南京农业大学资源与环境保护学院刘东阳课题组。

第一方面，本发明首先保护一种蛋白酶AbTp，所述蛋白酶AbTp至少包含氨基酸片段T-N-N-H-V-V-E-G-A、P-F-T-D-L-A-V-I-R-A-E和G-G-A-L-V-N-A-A-G-Q-V-I中的一种或多种。

优选的，所述蛋白酶AbTp的氨基酸序列选自如下(A1)或(A2)：

(A1)氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

(A2)将SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与(A1)所示的蛋白质具有相同功能的蛋白质。

优选的，所述蛋白酶AbTp来源于放线菌Actinobacteria bacterium。

第二方面，本发明还提供了生物材料，所述生物材料可为下述(B1)-(B4)中的任一种：

(B1)编码所述蛋白酶AbTp的DNA分子；

(B2)含有(B1)所述DNA分子的表达盒；

(B3)含有(B1)所述DNA分子的重组载体、或含有(B2)所述表达盒的重组载体；

(B4)含有(B1)所述DNA分子的重组微生物、或含有(B2)所述表达盒的重组微生物、或含有(B3)所述重组载体的重组微生物。

优选的，(B1)所述DNA分子选自如下(C1)或(C2)：

(C1)核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

(C2)与SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或以上同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。

SEQ ID NO：2所示的DNA分子编码氨基酸序列SEQ ID NO：1的蛋白酶。