[发明专利]一种单链抗体或其衍生物的测定方法

说明书

本发明公开了一种单链抗体或其衍生物的测定方法。本发明提供了一种单链抗体或其衍生物的测定方法；所述的测定方法为色谱法；所述的色谱法的固定相由基质和与基质连接的配基组成，所述的基质为表面经乙二醇二缩水甘油醚修饰的多孔聚丙烯酸甲酯小球；所述的配基为重组Protein A；所述的单链抗体或其衍生物为单体和/或聚合体；所述的色谱法的流动相依次为流动相A、流动相B、流动相A。该方法能够分离并定量检测单链抗体或其衍生物。

技术领域

本发明涉及一种单链抗体或其衍生物的测定方法。

背景技术

单克隆抗体的典型结构通常包括F_ab(Fragment of antigen binding)区域和F_c(fragment crystallizable)区域，其中基因工程蛋白(Protein A或Protein G蛋白)主要与F_c区域特异性结合，基于此原理可进行抗体的浓度测定或纯化。对于单链抗体(scFv抗体)或其衍生物，由于其结构中缺乏能与Protein A或Protein G蛋白结合的F_c区域，无法被亲和捕获和定量分析，因此市场上还没有一种用于scFv抗体或其衍生物细胞收获液蛋白浓度定量检测的色谱分析柱，对该类抗体蛋白或基于此结构的多特异性抗体蛋白浓度的准确定量仍为一个难题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有技术缺乏单链抗体或其衍生物的测定方法，为此，本发明提供了一种单链抗体或其衍生物的测定方法，该方法能够分离并定量检测单链抗体或其衍生物。

本发明提供了一种单链抗体或其衍生物的测定方法；所述的测定方法为色谱法；

所述的色谱法的固定相由基质和与基质连接的配基组成，所述的基质为表面经乙二醇二缩水甘油醚修饰的多孔聚丙烯酸甲酯小球；所述的配基为重组Protein A；

所述的单链抗体或其衍生物为单体和/或聚合体；

所述的色谱法的流动相依次为流动相A、流动相B、流动相A；所述的流动相A为pH7.0-7.5的缓冲溶液；当所述的单链抗体或其衍生物为单体和/或聚合体时，所述的流动相B为0.08M～0.12M NaOH水溶液，或者，当所述的单链抗体或其衍生物中聚合体的占比小于等于2％时，所述的流动相B为pH＝3.0的100mM Gly-HCl。

在某一方案中，所述的测定方法中的某些技术特征如下所述，其余的技术特征如其余任一方案所述(以下简称“在某一方案中”)：

所述的单链抗体可为靶向VEGF-A的单链抗体。

在某一方案中，所述的单链抗体的V_H可包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

在某一方案中，所述的单链抗体的V_L可包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

在某一方案中，所述的单链抗体中的V_H和V_L可通过接头1可操作地连接。

在某一方案中，所述的接头1可包含序列(GGGGS)n，n＝1、2、3或4。

在某一方案中，所述的单链抗体可含有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

在某一方案中，所述的单链抗体的衍生物可为包含所述单链抗体的融合蛋白。

在某一方案中，所述的包含所述单链抗体的融合蛋白可还含有靶向Ang2的VHH。

在某一方案中，所述的靶向Ang2的VHH可含有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

在某一方案中，所述的靶向Ang2的VHH可位于所述抗体的C端。