[发明专利]一种单链抗体或其衍生物的测定方法

权利要求书

1.一种单链抗体或其衍生物的测定方法；所述的测定方法为色谱法；

所述的色谱法的固定相由基质和与基质连接的配基组成，所述的基质为表面经乙二醇二缩水甘油醚修饰的多孔聚丙烯酸甲酯小球；所述的配基为重组Protein A；

所述的单链抗体或其衍生物为单体和/或聚合体；

所述的色谱法的流动相依次为流动相A、流动相B、流动相A；所述的流动相A为pH 7.0-7.5的缓冲溶液；当所述的单链抗体或其衍生物为单体和/或聚合体时，所述的流动相B为0.08M～0.12M NaOH水溶液，或者，当所述的单链抗体或其衍生物中聚合体的占比小于等于2％时，所述的流动相B为pH＝3.0的100mM Gly-HCl。

2.如权利要求1所述的单链抗体或其衍生物的测定方法，其特征在于，其满足下述条件中的一个或多个：

(1)所述的pH 7.0-7.5的缓冲溶液为pH 7.2的缓冲溶液；

(2)所述的pH 7.0-7.5的缓冲溶液为含有磷酸盐、Tris-HCl或醋酸-醋酸钠缓冲溶液；

(3)所述的pH 7.0-7.5的缓冲溶液含有或不含有NaCl。

3.如权利要求2所述的单链抗体或其衍生物的测定方法，其特征在于，所述的pH 7.0-7.5的缓冲溶液为20mmol/L Tris-HCl，150mmol/L NaCl，pH7.2。

4.如权利要求1所述的单链抗体或其衍生物的测定方法，其特征在于，其满足下述条件中的一个或多个：

(1)所述的单链抗体为靶向VEGF-A的单链抗体；

(2)所述的单链抗体的衍生物为包含所述单链抗体的融合蛋白；

(3)所述的单链抗体为单体和聚合体、或者、聚合体；

(4)所述的单链抗体的衍生物为单体和聚合体、或者、聚合体；

(5)所述的测定方法为定量测定方法；

(6)所述的测定方法为高效液相色谱法；

(7)所述的色谱法的固定相的平均粒径小于等于50μm；

(8)所述的基质为亲水基质；

(9)所述的重组Protein A由通过重组连接的4个经改造的Protein A功能域蛋白组成；

(10)所述的重组Protein A通过取向控制与所述的基质连接；

(11)所述的固定相的形态为色谱柱；

(12)当所述的单链抗体或其衍生物为单体和/或聚合体时，所述的流动相B为0.1MNaOH水溶液；

(13)所述的流动相的流速为2ml/min；

(14)所述的流动相的洗脱时间为5min；

(15)所述的色谱法的柱温为25℃；

(16)所述的色谱法的检测波长为280nm；

(17)所述的色谱法的分析对象含有或不含有所述的单链抗体；

(18)所述的色谱法的进样体积为5μL-25μL；

(19)所述的色谱法的进样量为5μg-25μg。