[发明专利]一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针，其特征在于，所述荧光探针为(E)-2-((2-((2-羟乙基)硫基)丙烷-2-基)硫基)乙基-(4-(2-(3-(二氰亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)氨基甲酸酯或(E)-N-(4-(2-(3-(二氰基亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)甲酰胺，所述(E)-2-((2-((2-羟乙基)硫基)丙烷-2-基)硫基)乙基-(4-(2-(3-(二氰亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)氨基甲酸酯的结构式如下：

所述(E)-N-(4-(2-(3-(二氰基亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)甲酰胺的结构式如下：

2.一种如权利要求1所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针的制备方法，其特征在于，所述(E)-2-((2-((2-羟乙基)硫基)丙烷-2-基)硫基)乙基-(4-(2-(3-(二氰亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)氨基甲酸酯的合成路线如下：

化合物二氰基异佛尔酮与2,2'-(丙烷-2,2-二基双(硫烷二基))双乙醇，在缩合剂与缚酸剂的作用下，化合物二氰基异佛尔酮和缩合剂制备混合体系，混合体系再和2,2'-(丙烷-2,2-二基双(硫烷二基))双乙醇进行于有机溶剂中反应得到目标探针(E)-2-((2-((2-羟乙基)硫基)丙烷-2-基)硫基)乙基-(4-(2-(3-(二氰亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)氨基甲酸酯；

所述缩合剂为二(三氯甲基)碳酸酯。

3.根据权利要求2所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针的制备方法，其特征在于，所述缚酸剂选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、乙二胺、无水碳酸钾、无水碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂或1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯中的任意一种。

4.根据权利要求2所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自甲苯、甲醇、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、DMF或DMSO中的任意一种。

5.根据权利要求2所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针的制备方法，其特征在于，二氰基异佛尔酮和缩合剂制备混合体系步骤中的反应温度为0～200℃，所述二氰基异佛尔酮和缚酸剂的摩尔比为1:1～1:20，所述混合体系和2,2'-(丙烷-2,2-二基双(硫烷二基))双乙醇反应温度为0～100℃。

6.一种如权利要求1所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针的制备方法，其特征在于，所述(E)-N-(4-(2-(3-(二氰基亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)甲酰胺的合成路线如下：

化合物二氰基异佛尔酮与甲酸，在加热条件下直接反应得到目标探针(E)-N-(4-(2-(3-(二氰基亚甲基)-5,5-二甲基环己-1-烯-1-基)乙烯基)苯基)甲酰胺。

7.根据权利要求6所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针的制备方法，其特征在于，二氰基异佛尔酮和甲酸的反应温度为0～200℃。

8.一种如权利要求1所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针在耐受活细胞中活性氧的干扰下，可视化时时监测活细胞粘度中的应用。

9.一种如权利要求1所述的一种活性氧耐受的二氰基异佛尔酮荧光探针在可视化实时监测活细胞中线粒体粘度和/或生理活动中的应用。