[发明专利]一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂，其特征在于，所述试剂包括(NH₄)₂SO₄，KCl，MgSO₄，促核酸释放试剂，dNTP，N基因LAMP引物，Bst DNA聚合酶大片段，逆转录酶和显色试剂，所述显色试剂为pH或者镁离子响应的显色试剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂，其特征在于，所述试剂共20～30μL，包含10mM(NH₄)₂SO₄，50mMKCl，8mM MgSO₄，0.2～1.0％促核酸释放试剂，2～20mMdNTP，6条0.1～1.6μM N基因LAMP引物，200～800ng/μLBst DNA聚合酶大片段，0.2～20ng/μL逆转录酶和0.2～0.6mg/mL显色试剂，所述显色试剂为间甲酚紫与偶氮氯膦Ⅲ的混合液，或者溴百里酚蓝与偶氮胂I的混合液。

3.根据权利要求2所述的一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂，其特征在于，所述显色试剂为0.2mg/mL间甲酚紫与0.2mg/mL偶氮氯膦Ⅲ的混合液，或者0.4mg/mL溴百里酚蓝与0.2mg/mL偶氮胂I的混合液。

4.根据权利要求2所述的一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂，其特征在于，所述N基因LAMP引物包括N gene引物组合，或ORF 1ab基因引物组合，或者人基因RPLP0引物组合，所述N gene引物组合如SEQ ID NO：1～6所示，所述ORF 1ab基因引物组合如SEQ ID NO：7～12所示，所述人基因RPLP0引物组合。

5.根据权利要求2所述的一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂，其特征在于，所述促核酸释放试剂包括Tween 20和CHAPS，所述Tween 20和CHAPS的用量比为1:1。

6.根据权利要求2所述的一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂，其特征在于，所述逆转录酶为2-8ng/μL AMV逆转录酶，或者5-20ng/μL Tth DNA聚合酶，或者0.2-0.8ng/μLHIV逆转录酶。

7.一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括外套管和内套管，所述外套管预装有反应试剂，所述内套管预装有取样液，所述反应试剂包括Tris-HCl，KCl，dNTP，N基因LAMP引物，Bst DNA聚合酶大片段，AMV逆转录酶，所述取样液包括(NH₄)₂SO₄，KCl，MgSO₄，Tween 20，CHAPS和显色试剂，所述显色试剂为间甲酚紫与偶氮氯膦Ⅲ的混合液，或者溴百里酚蓝与偶氮胂I的混合液。

8.根据权利要求7所述的一种用于SARS-CoV-2的可视化核酸检测试剂盒，其特征在于，所述反应试剂为20μL，包括10mMTris-HCl(pH 8.8)，300mMKCl，16mMdNTP，1～16μM的6条N基因LAMP引物，0.1μg/μLBst DNA聚合酶大片段，8ng/μL AMV逆转录酶；所述取样液为200-300μL，包括10mM(NH₄)₂SO₄，50mMKCl，8mM MgSO₄，0.5％Tween20，0.5％CHAPS和显色试剂，所述显色试剂包括0.2mg/mL间甲酚紫与0.2mg/mL偶氮氯膦Ⅲ的混合液，或者0.4mg/mL溴百里酚蓝与0.2mg/mL偶氮胂I的混合液。