[发明专利]一种具有免疫抑制活性的色酮类化合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种具有免疫抑制活性的色酮类化合物及其制备方法和应用，由天门冬拟茎点霉Phomopsis asparagi DHS‑48分离得到新的色酮类化合物，命名为：Phomopsinol A，本发明确定了Phomopsinol A化合物的平面结构和立体结构，并经过细胞免疫抑制活性实验研究表明，Phomopsinol A化合物具有较好的免疫抑制活性且细胞毒性低，可通过直接降低钙调磷酸酶活性发挥免疫抑制作用，可作为抑制细胞内NFAT蛋白表达，抑制CN/NFAT信号通路的免疫抑制剂，用于制备免疫性疾病的免疫抑制药物。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种具有免疫抑制活性的色酮类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

色酮学名苯并-γ-吡喃酮，具有其母核结构的衍生物统称为色酮类化合物，是一类广泛存在于自然界中的生物活性物质，如具有抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌等多种生物活性，其生物活性与其取代情况有着密切的关系，不同的色酮结构表现不同的生物活性。随着越来越多的色酮类化合物被分离鉴定后，其生物活性研究受到国内外学者的重视，成为药物研发的热点之一，因此，色酮新结构的不断发现，有利于促进色酮类化合物在药物研发领域中广泛利用。

在自然微生物菌中，其能够产生萘酚类、黄酮类、生物碱、甾体和萜类等多种次生代谢产物。天门冬拟茎点霉为Phomopsis属微生物真菌，分生孢子器球形、凸镜形、半球形或立锥形，常在不明显的斑点中形成，器壁厚而坚硬，多数革质或炭质。目前尚未有从天门冬拟茎点霉中分离出色酮类化合物的相关报道。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种具有免疫抑制活性的色酮类化合物及其制备方法和应用

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供一种具有免疫抑制活性的色酮类化合物，所述色酮类化合物命名为：Phomopsinol A，其化学结构式如下所示：

进一步说明，所述Phomopsinol A是通过加入表观遗传修饰剂丁酸钠对天门冬拟茎点霉Phomopsis asparagi DHS-48进行表观遗传调控，分离得到；丁酸钠的浓度为50μM。

一种具有免疫抑制活性的色酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将天门冬拟茎点霉菌Phomopsis asparagi发酵获得的菌丝体采用乙酸乙酯浸提，重复3次，每次72h，浓缩并合并提取物，得到粗提物；

(2)将粗提物在硅胶柱色谱上进行色谱分离，使用CH₂Cl₂-甲醇二元系统进行梯度洗脱，CH₂Cl₂与甲醇的体积比为：100:0-0:100，极性依次递增，得到Fr.1-Fr.9组分；

(3)将组分Fr.6置于硅胶CC采用体积比为2:1的CH₂Cl₂-乙酸乙酯洗脱液等度洗脱，得到Fr.6.1-Fr.6.6组分；

(4)将组分Fr.6.3置于葡聚糖凝胶Sephadex LH-20CC采用体积比为1:1的甲醇-CH₂Cl₂纯化得到Phomopsinol A。

进一步说明，Phomopsinol A在制备免疫抑制剂中的应用。

Phomopsinol在制备以钙调磷酸酶为靶点，抑制钙调磷酸酶活力的免疫抑制剂中的应用。

Phomopsinol A在制备抑制细胞内NFAT蛋白表达的免疫抑制剂中的应用。

Phomopsinol A在制备抑制CN/NFAT信号通路的免疫抑制剂中的应用。