[发明专利]一种基于血浆外泌体miRNA的ESCC诊断试剂盒

说明书

本发明涉及一种基于血浆外泌体miRNA的ESCC诊断试剂盒，通过对标志物miR‑636、miR‑7641、miR‑28‑3p和miR‑1246进行实时荧光定量PCR，能够早期诊断ESCC，敏感度和特异度较高。

技术领域

本发明涉及一种基于血浆外泌体miRNA的ESCC诊断试剂盒。

背景技术

食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)在全球癌症发病率中排名第七，在癌症死亡率中排名第六，是中国第四大恶性肿瘤之一，多数患者确诊时已处于晚期，肿瘤恶性程度高，病死率高。ESCC患者在诊断时往往处于淋巴结转移的阶段，其5年生存率约为20％。ESCC患者发病后多可见进行性吞咽困难症状，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，最后水及唾液也难以咽下，因此，尽早明确诊断，及时开展有效的治疗，提高患者的5年生存率是至关重要的。

目前，ESCC的诊断手段主要包括以下三类：影像学检查，内镜活检和实验室检查。

1)影像学检查：包括X线食管钡剂或钡气双重对比造影、CT扫描等，是诊断中晚期ESCC的首选手段。食管造影对临床患者的检出准确率＜50％，对筛查发现早期ESCC的价值有限，是基层医院采用的筛查和诊断方法。

2)内镜检查：随着内镜检查、病理活检的普及和技术的发展，早期ESCC的发现率和诊断率明显提高。目前出现了一些新的内镜系统，包括色素内镜、超声内镜、显微内镜、光学相干断层成像等技术，也使ESCC的检出率得到了很大的提高。

3)实验室检查：可用于ESCC筛查和聚焦高危目标人群进一步精查，提高筛查率和早期癌症的检出率，主要包括以下项目：

①血清肿瘤标志物检测：在组织器官发生形态学变化之前检测血清中肿瘤标志物，是早期发现无症状微肿瘤灶的唯一途经，可用于早期癌症的预警，引导进一步检查；也是检出早期癌症和辅助诊断的简便、经济、快速、无创和监测评估的参考指标。

②液体活检技术：是一种通过人体的血液、唾液、尿液等体液检测用于肿瘤诊断的新兴无创技术。目前针对ESCC的液体活检项目主要是血液中的循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA(ctDNA)、微小RNA(miRNA)和外泌体等液体活组织检查，敏感度可达60％以上，具有取材简便、微创、可重复性和实时动态监测、克服肿瘤的异质性、检测信息全面等优势，在肿瘤风险预警、筛查、早期辅助诊断、精准靶向诊疗和疗效监测、预后评估中有潜在应用价值；其中ctDNA可获得肿瘤的基因信息，减少肿瘤异质性，有助于筛查和早期诊断，对ESCC的敏感度可达到75％～90％；循环肿瘤细胞反映肿瘤的恶性程度，可作为监测肿瘤进展和判断预后的精准敏感指标。

近些年来，miRNA能够作为疾病诊断的生物标志物这一发现引起众多科学工作者的兴趣，尤其是作为肿瘤诊断标志物方面更是备受关注。miRNAs是一类约有19～25个核苷酸的短的非编码RNA，具有转录后调控能力的小分子，单个microRNA能够通过抑制复合物与多个mRNA结合，阻断整个生物途径。成熟的miRNA被包裹在脂质泡中以外泌体或蛋白复合物的形式存在，作为肿瘤抑制因子或致癌因子，miRNA在癌症的临床诊断中发挥一定作用。Liu等人发现，miR-455-3p在各种癌症中显著上调，并且在ESCC的发生发展过程中发挥着重要的作用。Zhang等人研究发现，miR-644a的下调在促进ESCC细胞的侵袭性方面发挥重要作用。He等人研究发现miR-143-3p在ESCC中作为抑癌因子，通过靶向QKI-5调控细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化。Liu等人研究发现，3-miRNA panel(miR-30e-3p、miR-146a-5p、miR-148a-3p)能够作为诊断结直肠癌患者的生物标志物。另外，Dai等采用测序技术检测ESCC患者血清miRNA的表达，发现miR-1290可作为ESCC早期诊断的无创性肿瘤生物标志物，并且miR-1290是ESCC预后的独立危险因素。血清标志物的检测与食管造影和超声内镜检査相比更为方便，血液检测避免了内镜检查可能出现的食管损伤等风险。并且基于血液的分析可以合并到常规血液检查中，这可以显著减少临床检查所用时间。