[发明专利]镧系配合物及其制备方法、荧光标记试剂、荧光标记方法

说明书

本发明属于配位化合物技术领域，具体涉及一种镧系配合物及其制备方法、荧光标记试剂、荧光标记方法，结构如下：其中A为聚乙烯亚胺类和聚丙烯亚胺类中的任意一种；F为2,6‑二(N‑吡唑)吡啶羧酸类，包括如下结构：其中R4为酯基、酰胺基、芳基、具有活性取代的芳基、杂环基、炔基或者具有活性取代基的杂环基中的任意一种；Ln为镧系金属，包括Td³⁺、Eu³⁺；本发明的镧系配合物及其制备方法、荧光标记试剂、荧光标记方法通过将多个镧系配合物连接在一起形成多聚的方式解决了2，6‑二(N‑吡唑)吡啶氨基羧酸类镧系配合物摩尔消光系数小的问题，同时通过该方式制备的镧系配合物还具备稳定性好、亮度高的优点。

技术领域

本发明属于配位化合物技术领域，具体涉及一种镧系配合物及其制备方法、荧光标记试剂、荧光标记方法。

背景技术

在众多的免疫检测中，均相时间分辨免疫分析不需要反复洗涤以除去游离的标记物，极大地简化了操作步骤，加快了检测速度，也使检测过程更加易于实现自动化操作，同时，它还具有检测灵敏度高、可靠性强、实验结果假阳性/阴性率低等优势，因此，长期以来被作为免疫分析中的前沿技术被深入研究。

镧系荧光配合物具有分子量小、修饰方便、抗漂白能力强等特点被广泛用在均相免疫分析中，镧系荧光配合物主要包括冠醚类镧系配合物、β-二酮类镧系配合物、多齿羧酸类类镧系配合物、穴状镧系配合物和杯芳烃类镧系配合物等。国内外虽然已经报道了多种镧系配合物，但是满足实际应用需求的却不多，理想的镧系荧光配合物应该具有较高的摩尔消光系数、较高的荧光量子产率、较长的荧光寿命、水溶液中较好的溶解性以及水溶液中较强的稳定性。

虽然法国Cisbio公司开发出了应用于药物筛选的Eu³⁺，Tb³⁺穴状配合物，并且将该产品实现了商品化，但是，此类化合物非常昂贵(2万/50nM左右)，同时，此类配合物的合成原料大多未商业化、合成路线长、操作过程繁琐、产品收率极低，同时，此类化合物还存在荧光量子产量低(0.4)，在水溶液中的溶解性差，标记过程复杂、重复性差等不足。

2，6-二(N-吡唑)吡啶氨基羧酸类化合物与穴状铽配合物相比具有合成路线短、产量高、水溶性好，荧光寿命长、荧光量子产量高(0.6)等优势，但是此类镧系配合物和穴状镧系配合物的摩尔消光系数小，都在20000M^-1cm^-1左右，造成用于标记检测过程中荧光亮度不高，用于检测指标时检测限往往只能达到10^-9g/L，仅能用于部分高丰度靶标的检测。

倘若发展一种摩尔消光系数大的2，6-二(N-吡唑)吡啶氨基羧酸类镧系配合物，将极大促进均相体系中时间分辨免疫荧光检测的发展。

发明内容

本发明提供了一种镧系配合物及其制备方法、荧光标记试剂、荧光标记方法，以解决镧系配合物摩尔消光系数小的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种镧系配合物，结构如下：

其中A为聚乙烯亚胺类和聚丙烯亚胺类中的任意一种；F为2,6-二(N-吡唑)吡啶羧酸类，包括如下结构：

其中R₄为酯基、酰胺基、芳基、具有活性取代的芳基、杂环基、炔基或者具有活性取代基的杂环基中的任意一种；Ln为镧系金属，包括Td³⁺、Eu³⁺。

又一方面，本发明还提供了一种如前所述镧系配合物的制备方法，包括如下步骤：步骤S1，将化合物1、乙醇和[Pd(PPh₃)₂Cl₂]和干燥三乙胺溶于15mL甲苯中，CO鼓泡条件下100℃油浴加热14h，反应完毕，减压出去溶剂，残余物加入100mL二氯甲烷溶解，水洗涤若干次，饱和食盐水洗涤，有机相用Na₂SO₄干燥，减压除去溶剂，残余物经柱色谱纯化得黄色油状化合物2；