[发明专利]配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及其用途

权利要求书

1.一种配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物，其特征在于，该组合物含有糖皮质激素、人白介素2、人白介素15、CD335单克隆抗体和CD16单克隆抗体，其中，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，人白介素2的含量为10-40IU，人白介素15的含量为0.6-2.4ng。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，所述糖皮质激素的含量为0.06-0.3μg，CD16单克隆抗体的含量为1-4ng；

优选地，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，所述糖皮质激素的含量为0.07-0.15μg、人白介素2的含量为10-20IU、人白介素15的含量为0.6-1.2ng和CD16单克隆抗体的含量为1-2ng。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述糖皮质激素为泼尼松、甲泼尼松、倍他米松、丙酸倍氯米松、泼尼松龙、氢化可的松和地塞米松中的至少一种，优选为氢化可的松。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物中还包括X-VIVO 15培养基、犬自体血浆和灭活的A群链球菌(Streptococcus pyogenes)中的至少一种。

5.根据权利要求4所述组合物，其中，所述X-VIVO 15培养基和犬自体血浆的体积比为9-50：1；

和/或，相对于总量为1mL的X-VIVO 15培养基和犬自体血浆，所述CD335单克隆抗体的含量为50-200ng。

6.据权利要求4所述的组合物，其中，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，所述灭活的A群链球菌的含量为0-0.0016KE，优选为0.0004-0.0008KE；

和/或，所述灭活的A群链球菌优选为沙培林。

7.一种利用自体血浆体外培养犬自然杀伤细胞的方法，其特征在于，该方法包括：将犬自体血浆分离得到外周血单个核细胞与权利要求1-6中任意一项所述的组合物混合进行激活培养。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述组合物的用量使得犬外周血单个核细胞在混合体系中的初始细胞密度≥3×10⁶个细胞/mL；

和/或，所述激活培养的条件包括：饱和湿度，温度为36-38℃，CO₂含量为5-10％。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述体外培养的方法还包括将激活培养后的细胞进行分离和扩增；所述扩增的条件包括：饱和湿度，温度为36-38℃，CO₂含量为5-10％；所述扩增使用的培养液含有人白介素2、人白介素15、X-VIVO 15培养基和犬自体血浆。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述扩增使用的培养液中X-VIVO 15培养基和犬自体血浆的体积比为9-50：1；

和/或，相对于总量为1mL的X-VIVO 15培养基和犬自体血浆，人白介素2的含量为1000-4000IU，优选为1000-2000IU；人白介素15的含量为30-120ng，优选为30-60ng。