[发明专利]一种种子促生微生物试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种种子促生微生物试剂及其制备方法，该微生物试剂中含有JC‑3jx菌株，该菌株为金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌。经过验证发现，JC‑3jx菌株不仅对多种植物病原真菌均表现出不同程度的抑制作用，对大豆疫霉的抑制率达到50％，而且其发酵上清液对供试的3种病原细菌也表现出明显的抑制活性，其中对革兰氏阴性的大肠杆菌抑制活性最好。同时，促生结果显示，含有JC‑3jx菌株的微生物试剂对玉米种子生根和绿豆发芽有良好的促进作用，体现了非常好的抑菌促生潜力。

技术领域

本发明涉及微生物试剂的技术领域，具体涉及一种种子促生微生物试剂及其制备方法。

背景技术

内生菌是指整个生活周期或生活史的部分阶段能够生活在宿主植物组织内，且它们的存在并未使植物组织的表型特征和功能有明显改变的菌类，主要包括内生真菌、内生细菌、内生放线菌。近年来，关于植物内生菌对提高植物次级代谢产物、促进植物生长以及增强植物抗逆性等方面作用的研究已广泛开展。

在我国传统医学中，石斛属多种植物的新鲜或干燥茎被收做药用，具有极高的药用价值，如铁皮石斛、霍山石斛、金钗石斛等。金钗石斛作为石斛属重要的成员，已列入中国药典，其内生菌种类丰富，数量众多，为研究微生物提供了较多的资源。金钗石斛内生菌是获得天然抗菌活性物质及开发绿色菌肥的又一重要资源。相对石斛内生真菌而言，石斛内生细菌资源的研宄较少。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种种子促生微生物试剂，含有的JC-3jx菌株对种子生根和发芽有良好的促进作用，体现了非常好的抑菌促生潜力；本发明的目的之二在于提供一种种子促生微生物试剂的制备方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种种子促生微生物试剂，所述微生物试剂含有金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae JC-3jx)，命名为JC-3jx菌株，保藏号为GDMCC No:62384，保藏日期为2022年4月14日，保藏分类命名为皮尔瑞娥类芽孢杆菌，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

进一步，所述JC-3jx菌株的rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

再进一步，所述微生物试剂中接种金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌的悬液浓度为1.6×10⁴～1.6×10⁶CFU/mL。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述的种子促生微生物试剂的制备方法，包括以下步骤：

将所述JC-3jx菌株进行斜面活化培养，再进行摇瓶种子扩大培养，再转入发酵罐培养，喷雾干燥后，得到种子促生微生物菌剂。

进一步，所述斜面活化培养的具体步骤为：采用NA培养基斜面培养进行活化，接种甘油菌至NA培养基斜面，进行培养后，得到F1代斜面，随后取F1代斜面转接至另一NA斜面培养基，培养后得到活化后的F2代斜面。

再进一步，所述摇瓶种子扩大培养的具体步骤为：将活化培养的斜面菌种加入生理盐水洗脱制备菌悬液，转接于含有种子培养基的摇瓶中，振动混合，再进行培养12h。

具体地，所述种子培养基包括葡萄糖、玉米淀粉、豆粕粉、酵母膏、蛋白胨、氯化钠、硫酸锰、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和水，调pH值为6.5～7.0，高压灭菌后制得。

进一步，所述发酵罐培养是将摇瓶培养好的种子液接种发酵罐；在发酵培养起始阶段，控制发酵罐通气量为200～250mL/min，搅拌控制为250～350rpm，温度控制在30-37℃，初始葡萄糖的浓度控制在20～30g/L；前12h控制体系的pH为6.5～7.0，控制溶解氧为25～45％，12h以后pH和溶氧不作限定。