[发明专利]一种种子促生微生物试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种种子促生微生物试剂，其特征在于，所述微生物试剂含有金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌，命名为JC-3jx菌株，保藏号为GDMCC No:62384，保藏日期为2022年4月14日，保藏分类命名为皮尔瑞娥类芽孢杆菌，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

2.如权利要求1所述的种子促生微生物试剂，其特征在于，所述JC-3jx菌株的rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

3.如权利要求1所述的种子促生微生物试剂，其特征在于，所述微生物试剂中接种金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌的悬液浓度为1.6×10⁴～1.6×10⁶CFU/mL。

4.权利要求1～3任一项所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将所述JC-3jx菌株进行斜面活化培养，再进行摇瓶种子扩大培养，再转入发酵罐培养，喷雾干燥后，得到种子促生微生物菌剂。

5.如权利要求4所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述斜面活化培养的具体步骤为：采用NA培养基斜面培养进行活化，接种甘油菌至NA培养基斜面，进行培养后，得到F1代斜面，随后取F1代斜面转接至另一NA斜面培养基，培养后得到活化后的F2代斜面。

6.如权利要求4所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述摇瓶种子扩大培养的具体步骤为：将活化培养的斜面菌种加入生理盐水洗脱制备菌悬液，转接于含有种子培养基的摇瓶中，振动混合，再进行培养12h。

7.如权利要求6所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述种子培养基包括葡萄糖、玉米淀粉、豆粕粉、酵母膏、蛋白胨、氯化钠、硫酸锰、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和水，调pH值为6.5～7.0，高压灭菌后制得。

8.如权利要求4所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述发酵罐培养是将摇瓶培养好的种子液接种至发酵罐；在发酵培养起始阶段，控制发酵罐通气量为200～250mL/min，搅拌控制为250～350rpm，温度控制在30-37℃，初始葡萄糖的浓度控制在20～30g/L；前12h控制体系的pH为6.5～7.0，控制溶解氧为25～45％，12h以后pH和溶氧不作限定。

9.如权利要求8所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，发酵周期控制在36h以内，停止发酵，将发酵液升温至60℃并维持一段时间，然后再加入麦芽糊精和氯化钙保护剂，混匀后进行喷雾干燥，喷雾塔的入口温度为160～180℃，出口温度为82～85℃，即得到活菌数＞1×10¹²CFU/g的种子促生微生物试剂。

10.如权利要求8所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述发酵罐中的液体培养基包括豆粕粉、麸皮、麦芽糖浆、可溶性淀粉、L-谷氨酸钠、MgSO₄·7H₂O、KCl、KH₂PO₄、FeSO₄、MnSO₄和轻质碳酸钙，调节初始的pH为6.8～7.0，灭菌后得到液体培养基。