[发明专利]用于对虾急性肝胰腺坏死病和肝肠胞虫的检测的引物探针组合、试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一种用于检测对虾急性肝胰腺坏死病和肝肠胞虫的引物探针组合，其包含：针对急性肝胰腺坏死病特征序列的第一引物组；针对肝肠胞虫特征序列的第二引物组；所述急性肝胰腺坏死病特征序列为pirA^VP基因序列；所述肝肠胞虫特征序列为肝肠胞虫的SWP1基因序列。本发明还提供了其在检测对虾急性肝胰腺坏死病和肝肠胞虫感染中的应用，以及检测试剂盒。本发明提供的引物探针组合和试剂盒不仅可以检测急性肝胰腺坏死病，还可以用于肝肠胞虫，或者同时检测上述两种疾病，特异性强、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及用于对虾急性肝胰腺坏死病和肝肠胞虫的双重荧光PCR检测的引物探针组合及试剂盒。

背景技术

急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopannecrosis disease,AHPND)是由副溶血性弧菌携带的质粒编码PirA^VP和PirB^VP毒素基因引起的一种对虾疾病。由于该疫病在早期(投苗30d左右)会引起虾苗不寻常的高死亡率而被称之为早死综合征(EMS)，该病在全球虾类主要养殖地区肆虐，给越南、中国、马来西亚、泰国、墨西哥和菲律宾等国对虾产业带来巨大损失。患病对虾主要临床症状表现为肝胰腺萎缩、颜色变浅，空肠空胃，甲壳变软，失去活力等，常为急性死亡，死亡率高达100％。

虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)于2009年在泰国养殖的生长缓慢的斑节对虾中首次被分离和命名，属于微孢子虫科、肠胞虫属。EHP主要寄生于对虾肝胰腺小管的上皮细胞内，已被证实与对虾生长缓慢关系密切。EHP流行已经对印度、泰国、中国、越南、马来西亚、印度尼西亚等亚洲各国的养殖虾业造成了严重的经济损失。

我国水产养殖规模在不断扩大，集约化养殖模式快速发展，水产养殖病害形势变的非常严峻，AHPND和EHP是当前对虾养殖主要病害，但目前尚缺少能够快速有效的检测方法。

发明内容

本发明提供了一种同时鉴定AHPND和EHP双重荧光PCR方法，适用于养殖场监控、海关、水产技术推广站等部门，对EHP和AHPND病原的检测、分离和鉴定分析，用于解决对虾养殖中EHP和AHPND流行、传播、预防和控制的问题。

本发明首先提供了一种用于检测对虾急性肝胰腺坏死病和肝肠胞虫的引物探针组合，其包含：

针对急性肝胰腺坏死病特征序列的第一引物组；

针对肝肠胞虫特征序列的第二引物组；

所述急性肝胰腺坏死病特征序列为pirA^VP基因序列；

所述肝肠胞虫特征序列为肝肠胞虫的SWP1基因序列。

在根据本发明的一个实施方案中，所述pirA^VP基因序列为SEQ ID NO:7。

在根据本发明的一个实施方案中，所述SWP1基因序列为SEQ ID NO:8。

在根据本发明的一个实施方案中，所述第一引物组由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3组成。

在根据本发明的一个实施方案中，所述第二引物组由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6组成。

在根据本发明的一个实施方案中，由第一引物对和第二引物对组成，其中，

所述第一引物组由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3组成；

所述第二引物组由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6组成。