[发明专利]L-乳酸脱氢酶及其编码基因与应用在审

申请号：	202210796881.7	申请日：	2022-07-08
公开（公告）号：	CN116286695A	公开（公告）日：	2023-06-23
发明（设计）人：	吴计划;刘振兴;王友礼;王竞辉;姜西娟;杨尚彤;刘胜先	申请（专利权）人：	万华化学（四川）有限公司;万华化学集团股份有限公司
主分类号：	C12N9/04	分类号：	C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/56;C12R1/19
代理公司：	北京信诺创成知识产权代理有限公司 11728	代理人：	吕鹏云;陈悦军
地址：	620031 四川省眉山市东坡***	国省代码：	四川;51
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摘要：
搜索关键词：	乳酸脱氢酶及其编码基因应用
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【权利要求书】：

1.一种L-乳酸脱氢酶，其是将SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的底物特异性提高的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的L-乳酸脱氢酶，其特征在于：所述L-乳酸脱氢酶是在SEQ IDNO:41所示的氨基酸序列的第61、75、77、103、150、230和/或276位进行氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的蛋白质；

优选为SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40所示的蛋白质。

3.编码权利要求1或2所述的L-乳酸脱氢酶的核酸分子。

4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的核酸分子：

1)具有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:21任一所示的核苷酸序列的核酸分子；

2)与1)限定的核酸分子杂交且编码权利要求1或2所述的L-乳酸脱氢酶的核酸分子；

3)与1)或2)限定的核酸分子具有90％以上的同一性且编码权利要求1或2所述的L-乳酸脱氢酶的核酸分子。

5.一种重组载体，其包含权利要求3或4所述的核酸分子。

6.一种重组细胞，其包含权利要求5所述的重组载体。

7.一种L-乳酸脱氢酶的制备方法，包括如下步骤：

对权利要求6所述的重组细胞进行诱导培养，得到培养物；

从所述培养物中分离权利要求1或2所述的L-乳酸脱氢酶。

8.权利要求1或2所述的L-乳酸脱氢酶、权利要求3或4所述的核酸分子、权利要求5所述的重组载体、权利要求6所述的重组细胞和/或权利要求7所述的方法制备得到的L-乳酸脱氢酶在制备乳酸中的应用。

9.一种制备乳酸的方法，包括如下步骤：对权利要求6所述的重组细胞进行发酵，催化底物葡萄糖，得到乳酸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述发酵包含好氧发酵和之后的厌氧发酵两个阶段；

所述好氧发酵的发酵条件为：搅拌、通风使得DO在30％以上，温度为35-42℃，pH为6.0-7.2；

所述厌氧发酵的发酵条件为：OD₆₀₀达到10-20时，加入IPTG诱导蛋白表达，OD₆₀₀达到30-35时，向发酵罐中补加葡萄糖溶液，使得发酵罐中葡萄糖的浓度在20-30g/L之间，关闭通风，转速降低到100-300r/min，温度为35-42℃，pH为6.0-7.2。