[发明专利]PCR反应体系、反应试剂、试剂盒和方法

说明书

本发明涉及一种PCR反应体系、反应试剂、试剂盒和方法。该PCR反应体系不含甘油和DMSO，包含：0.7M～1M甜菜碱、10ng/μL～300ng/μL DNA聚合酶、10μM～200μM dNTP、20mM～50mM Tris‑HCl、1mM～4mM Mgsupgt;2+/supgt;、70mM～80mM Ksupgt;+/supgt;、10mM～30mM NHsubgt;4/subgt;supgt;+/supgt;、0.1％(v/v)～0.25％(v/v)表面活性剂及0.01％(m/v)～0.1％(m/v)BSA。上述PCR反应体系对水稻叶片的扩增成功率高。

技术领域

本发明涉及PCR扩增技术领域，特别是涉及一种PCR反应体系、反应试剂、试剂盒和方法。

背景技术

水稻是人类重要的粮食作物之一，总产量占世界粮食作物产量第三位，种植与食用的历史都相当悠久。随着社会经济的发展和生活水平的提高，人们对稻米品质和产量的要求也相应的不断提高。为提高水稻产量和品质，从分子水平研究水稻叶片是一个重要的方向。

水稻叶片分子水平上的研究过程中，提取水稻叶片的DNA和扩增出相应的基因片段是必不可少的环节。目前的方法主要有两种：一种通过CTAB法提取水稻叶片的DNA并纯化之后进行相应的PCR扩增反应而收获目的基因片段(即传统法)，另一种是通过裂解液裂解水稻叶片后取裂解上清或直接使用水稻叶片进行相应的PCR扩增反应而收获目的基因片段(即直扩法)。传统法的过程较为繁琐，但成功率高，而直扩法操作简单，但成功率较低。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够改善直接采用水稻叶片进行扩增的直扩法的成功率的PCR反应体系。

此外，还有必要提供一种能够改善直接采用水稻叶片进行扩增的直扩法的成功率的PCR反应试剂和试剂盒、以及一种成功率高的PCR方法。

一种PCR反应体系，所述PCR反应体系不含甘油和DMSO，所述PCR反应体系包含：0.7M～1M甜菜碱、10ng/μL～300ng/μLDNA聚合酶、10μM～200μM dNTP、20mM～50mM Tris-HCl、1mM～4mM Mg²⁺、70mM～80mM K⁺、10mM～30mM NH₄⁺、0.1％(v/v)～0.25％(v/v)表面活性剂及0.01％(m/v)～0.1％(m/v)BSA。

上述PCR反应体系不含甘油和DMSO，含有甜菜碱、DNA聚合酶、dNTP、Tris-HCl、Mg2⁺、K⁺、NH₄⁺、表面活性剂及BSA，通过各组分的相互配合，上述PCR反应体系应用于水稻叶片的直扩时，具有较高的成功率。

在其中一个实施例中，所述DNA聚合酶包括DeepVentDNA聚合酶、PfuDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶；在所述PCR反应体系中，所述DeepVentDNA聚合酶的浓度为0.5ng/μL～2ng/μL，所述PfuDNA聚合酶的浓度为100ng/μL～300ng/μL，所述TaqDNA聚合酶的浓度为10ng/μL～100ng/μL；

优选地，所述PCR反应体系还包含0.1ng/μL～0.5ng/μL复制因子A和/或100ng/μL～200ng/μL焦磷酸酶。

在其中一个实施例中，所述PCR反应体系包含0.5mM～2mMNaOH。

在其中一个实施例中，所述表面活性剂包括曲拉通X-100、吐温-20及NP-40中的至少一种；

和/或，所述PCR反应体系还包含染料；所述染料包括二甲苯青和柠檬黄中的至少一种。

一种PCR反应试剂，以40mL总体积的2倍体系计，所述PCR反应试剂包含：

5×buffer16mL；