[发明专利]活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物

说明书

本发明公开了活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物，所述活化T细胞，是从患者自身组织或体液中分离的T细胞，先进行抗人CD3抗体分选得到CD3⁺T细胞，再经抗人CD3抗体、抗人CD28抗体和人IL‑2刺激活化获得；所述阻断性抗体是抗SIA‑IgG抗体、抗Siglec‑7抗体、抗Siglec‑9抗体、抗Siglec‑10抗体及抗PD‑1抗体中的任意一种或几种。相较于单纯活化T细胞或者单纯阻断性抗体，联合用药具有更加明显的治疗效果，说明使用阻断性抗体与活化T细胞产生了协同增效作用，从而起到更好的抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及肿瘤免疫治疗技术领域，具体涉及活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物。

背景技术

使用T细胞进行肿瘤免疫治疗在临床上已取得突破性进展，主要治疗思路是通过基因工程技术，将T细胞激活，并装上定位导航装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体），成为CAR-T细胞，这种T细胞利用其“定位导航装置”CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过直接免疫杀伤及释放大量的多种效应因子，进而杀灭肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。但该技术难度大、实施成本高，且目前只对B细胞白血病有效。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的上述问题，提供一种活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物。

本发明技术方案详述如下：

第一方面，本发明提供了活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途，所述活化T细胞，是从患者自身组织或体液中分离细胞，先进行抗人CD3抗体分选得到CD3⁺T细胞，再经抗人CD3抗体、抗人CD28抗体和人IL-2刺激活化获得；所述阻断性抗体是抗人癌细胞产生的唾液酸化IgG(SIA-IgG，或SIG)的抗体、抗人Siglec-7抗体、抗人Siglec-9抗体、抗人Siglec-10抗体及抗人PD-1抗体中的任意一种或几种。

可选或优选的，上述用途中，所述组织为癌组织，所述体液为外周血、胸水或腹水。其中由于胸水和腹水相较于癌组织和外周血量更大、对患者来说属于废物获取更容易，因此是更为适合临床应用的体液材料。

可选或优选的，上述用途中，所述体液为胸水或腹水时，活化T细胞的制备方法如下：

患者胸水或腹水经离心得细胞沉淀，细胞沉淀经PBS清洗后，用密度梯度离心法分离获得初级体液细胞，初级体液细胞用人淋巴细胞分离液进行离心分离获得体液细胞；

体液细胞用抗人CD3抗体避光孵育，然后用PBS洗涤一次并重悬于含1%（v/v）FBS的PBS中，用流式分选仪分选出CD3⁺T细胞；

CD3⁺T细胞培养体系中加入抗人CD3抗体、抗人CD28抗体和人IL-2刺激诱导培养，获得活化T细胞。

其中，所述的初级体液细胞、体液细胞仅用于描述目的，代表经过密度梯度离心后获得的细胞、用人淋巴细胞分离液分离后获得的细胞，并非具有医学或者生物学特定含义的词。PBS即磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline），FBS即胎牛血清（Fetal BovineSerum）。

可选或优选的，上述用途中，所述分选得到的CD3⁺T细胞，是CD3⁺7AAD^-的T细胞。7AAD是一种经典的核酸标记染料，在流式细胞术中能够用于标记死细胞，上述CD3⁺7AAD^-的T细胞，是经7AAD染色后呈阴性（未被染色）的活T细胞。

可选或优选的，上述用途中，所述抗人癌细胞产生的SIA-IgG的抗体为RP215或抗SIA-IgG人源化抗体，所述抗SIA-IgG人源化抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。