[发明专利]一种脑胶质瘤类器官、培养基及培养方法

说明书

本发明涉及一种脑胶质瘤类器官、培养基及培养方法，包括基础培养基和特异性添加因子，所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：不含维生素A的B27，0.1‑5×；N2，0.1‑5×；N‑acetylcysteine，0.2‑5mM；EGF:10‑500ng/ml；NGF:10‑1000ng/ml；GlutaMax，0.1‑5×；Y27632，5‑50μM；Nicotinamide，0.5‑50mM；青霉素链霉素混合液，0.1‑5×；前述的百分浓度表示质量浓度。本发明可对人脑胶质瘤组织进行体外培养，在培养过程中，形成从细胞构成及空间结构均近似于体内肿瘤的类器官。本发明培养基含有脑胶质瘤细胞培养所需的最少组分，用于培养脑胶质瘤组织，形成的类器官维持了原发组织的形态结构和基因特征。本发明与传统类器官培养方法相比，大大降低了生长因子和基质胶的用量，极大程度上节约了培养成本。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种脑胶质瘤类器官、培养基及培养方法。

背景技术

目前，小鼠是医学研究中最重要的模型动物，小鼠的基因与人类相似度达95％，拥有人类相似的免疫系统及易于进行基因工程与细胞工程的改造，这些优点决定了小鼠模型在生物学医学科学研究中得天独厚的优势。然而，即便小鼠动物模型有诸多的优势，却依然存在建模流程繁杂、建模时间长、操作难度大、硬件要求高和建模成本高昂等特点。

类器官是由诱导的多能干细胞、胚胎干细胞或成体组织驻留的祖细胞体外培养形成的三维细胞团结构。类器官是二维培养和活体模型之间的重要桥梁，其较单层细胞培养模型更具生理学相关性，同时比活体模型更容易操纵利基成分、信号通路和基因组编辑。类器官的价值在于它们能够自组织成最小的生物单位，表现出与原始组织相似的功能和复杂性。类器官的可操作性预示着类器官将为广泛的基础研究提供出色的模型系统，包括表达谱研究和体内难以获得的稀有细胞谱系的分析。同时，可将类器官移植体内进行功能评估。此外，也可从患者自身组织或诱导的多能干细胞产生类器官可用于研究缺乏动物模型的罕见疾病。在再生医学中，类器官技术有望替代严重受损的器官，如1型糖尿病患者的胰腺。

脑胶质瘤是预后较差的肿瘤类型之一，患者的平均生存期不超过一年，且难以进行R0切除手术，且脑胶质瘤目前尚无有效药物对其进行控制。患者只能在复发后进行开颅手术减轻肿瘤负荷。此外，目前脑胶质瘤尚无明确的治疗相关靶点，因此通过基因检测难以进行精准靶向治疗方案的确定。综上所述，一种新的脑胶质瘤个体化用药的技术手段势在必行。类器官技术可以通过直接观察肿瘤细胞在体外对药物的反应，判断药物能否对肿瘤形成杀伤，被视为下一代的个体化精准医学检测技术。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述问题，提供一种脑胶质瘤类器官、培养基及培养方法。

为解决现有技术存在的问题，本发明的技术方案为：

一方面，本发明提供一种脑胶质瘤类器官培养基，包括基础培养基和特异性添加因子，所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：

不含维生素A的B27，0.1-5×；

N2，0.1-5×；

N-acetylcysteine，0.2-5mM；

EGF:10-500ng/ml；

NGF:10-1000ng/ml；

GlutaMax，0.1-5×；

Y27632，5-50μM；

Nicotinamide，0.5-50mM；

青霉素链霉素混合液，0.1-5×；

前述的百分浓度表示质量浓度。

进一步的，所述特异性添加因子还包括以下终浓度的组分：非必需氨基酸(NEAAs)1-5×。