[发明专利]一种脑胶质瘤类器官、培养基及培养方法

权利要求书

1.一种脑胶质瘤类器官培养基，其特征在于：包括基础培养基和特异性添加因子，所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：

不含维生素A的B27，0.1-5×；

N2，0.1-5×；

N-acetylcysteine，0.2-5mM；

EGF:10-500ng/ml；

NGF:10-1000ng/ml；

GlutaMax，0.1-5×；

Y27632，5-50μM；

Nicotinamide，0.5-50mM；

青霉素链霉素混合液，0.1-5×；

前述的百分浓度表示质量浓度。

2.根据权利要求1所述的一种脑胶质瘤类器官培养基，其特征在于：所述特异性添加因子还包括以下终浓度的组分：非必需氨基酸(NEAAs)1-5×。

3.根据权利要求2所述的一种脑胶质瘤类器官培养基，其特征在于：所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：

不含维生素A的B27，1×；

N2，1×；

N-acetylcysteine，0.5mM；

非必需氨基酸(NEAAs)1×；

EGF:50ng/ml；

NGF:50ng/ml；

GlutaMax，1×；

Y27632，20μM；

Nicotinamide，5mM；

青霉素链霉素混合液，3×；

前述的百分浓度表示质量浓度。

4.根据权利要求1所述的一种脑胶质瘤类器官培养基，其特征在于：所述基础培养基由Neural basal与Advanced DMEM/F12混合组成。

5.根据权利要求4所述的一种脑胶质瘤类器官培养基，其特征在于：所述Neural basal与Advanced DMEM/F12按照6-27:3(v/v)的比例混合。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种脑胶质瘤类器官培养基，其特征在于：所述培养基的制备方法为：将特异性添加因子加入到基础培养基中混合均匀既得。

7.一种脑胶质瘤类器官的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将新鲜的胶质瘤组织进行预处理，用含1％双抗的生理盐水进行数次洗涤、去除血块等杂质，并充分切碎；

2)将组织块进行消化、获取细胞团，离心去除上清备用；

3)取适量的权利要求1-6任一项所述的培养基，按每1-5×10⁵细胞使用2ml培养基重悬细胞，得到细胞悬液；

4)用移液器将细胞悬液滴加到细胞培养装置中，在温度为37℃，CO₂浓度为5％的环境下进行培养；

5)每隔2-3天更换一次液体培养基，培养3-5天可获得脑胶质瘤类器官。

8.根据权利要求7所述的一种脑胶质瘤类器官的培养方法，其特征在于：所述步骤2)中将组织块通过含胶原酶与分散酶的复合消化液进行消化。

9.根据权利要求7所述的一种脑胶质瘤类器官的培养方法，其特征在于：所述步骤4)中补充1％-5％基质胶到细胞悬液中并混匀。

10.一种脑胶质瘤类器官，其特征在于：是采用权利要求7-9任一项所述的培养方法获得。