[发明专利]一种酱油中黄曲霉毒素的检测方法

说明书

本发明涉及食品检测方法，特别涉及酱油中黄曲霉毒素的检测方法。它包括以下步骤：S1，混合对照品溶液的制备：配制AFT B₁、B₂、G₁、G₂混合标准储备液；S2，供试品溶液的制备：选取盐析剂和萃取溶剂，配制供试品溶液；S3，测定：精密吸取上述混合标准工作液进入液质联用仪检测，测定定量离子出峰面积，以进样浓度(X)为横坐标，定量离子峰面积(Y)为纵坐标，绘制黄曲霉毒素基质标准溶液曲线图；供试品溶液在相同条件下测定定量离子峰面积，依据上述基质标准曲线线性方程得出供试品中黄曲霉毒素浓度；S4，色谱及质谱条件的具体要求参数。本发明采用盐析辅助液液萃取法结合超高效液相色谱‑串联质谱法，能够对酱油中黄曲霉毒素进行高通量检测。

技术领域

本发明涉及食品检测方法，特别涉及酱油中黄曲霉毒素的检测方法。

背景技术

酱油拥有独特的风味和丰富的营养，同时易于消化吸收，深受消费者的喜爱。酱油的主要原料为大豆、小麦、麸皮等农作物，而农作物在种植和贮存过程中，容易受到真菌毒素的污染，再加上酱油在制作过程中需要酵母菌、曲霉菌等真菌的参与，容易受到霉菌毒素的污染，造成真菌毒素残留问题。黄曲霉毒素(aflatoxin，AFT)是由黄曲霉和寄生曲霉次级代谢产生的一组具有二氢呋喃香豆素结构的化合物。黄曲霉毒素是一种剧毒物质，具有严重的致癌性、致畸性和致突变性。目前已报道发现20余种黄曲霉毒素，常见的主要有AFTB₁、AFT B₂、AFT G₁、AFT G₂，其中AFT B₁毒性最强，是目前已知毒性最强的化合物之一。因此，为了保障酱油食品安全，我国GB 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中明确规定了酱油中AFT B₁的最大限量值不超过5μg/kg。

目前食品中黄曲霉毒素的定量检测主要为高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法。由于食物样品多样，成分基质复杂，而食物中的黄曲霉毒素浓度往往较低，因此在仪器分析前需采取适当的样品前处理技术进行富集和纯化。常见的前处理技术主要有液液萃取法、固相萃取法、免疫亲和层析法、磁珠免疫净化法、QuEChERS法等，由于酱油等发酵调味品基质较为复杂，目前采用的前处理方法以免疫亲和层析法为主，但该法检验成本高，操作相对繁琐，不适合高通量检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种前处理快速简单、成本低的酱油中黄曲霉毒素的检测方法。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种酱油中黄曲霉毒素的检测方法，其包括以下步骤：

S1，混合对照品溶液的制备：配制AFT B₁、B₂、G₁、G₂混合标准储备液；

S2，供试品溶液的制备：选取盐析剂和萃取溶剂，配制供试品溶液；

S3，测定：精密吸取上述混合标准工作液进入液质联用仪检测，测定定量离子出峰面积，以进样浓度(X)为横坐标，定量离子峰面积(Y)为纵坐标，绘制黄曲霉毒素基质标准溶液曲线图；供试品溶液在相同条件下测定定量离子峰面积，依据上述基质标准曲线线性方程得出供试品中黄曲霉毒素浓度；

S4，色谱及质谱条件：

色谱条件：流动相A：甲醇/乙腈混合液(v/v＝50/50)，流动相B：4-6mmol/L乙酸铵溶液；梯度洗脱程序：0.0～5.0min，40％A；0.5～3.0min，40％～60％A；3.0～4.0min，60％A；4.0～4.2min，60％～100％A；4.2～5min，100％A；5.0～5.5min，100％～40％A；5.5～9.0min，40％A；流速0.2-0.4mL/min；进样体积4-6μL；柱温30-40℃；