[发明专利]一种C1酯酶抑制剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种C1酯酶抑制剂及其制备方法，属于生物制药领域。以从血浆制备人凝血酶原复合物的废料即DEAE Sephadex A50凝胶吸附过程中经层析柱流出来的洗涤液为原料，采用PEG沉淀法纯化及capto MMC离子交换层析精制得到C1酯酶抑制剂，最终成品比活性高于6IU/mg。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体是指一种C1酯酶抑制剂及其制备方法。

背景技术

C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor，以下简称C1-INH)是血浆中的一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，分子量大约为100-105kDa，属于单链糖蛋白。人血浆中C1-INH平均浓度大约为0.2mg/mL，相当于1个血浆单位(PU)每毫升，单人C1-INH浓度为0.14mg/ml～0.38mg/ml。

C1-INH在多种生理系统中具有重要的调节作用。在补体系统中，C1-INH的缺少或功能缺损使得补体C1过度活化，继而引起C4及C2裂解失控，补体激肽增多，导致微血管通透性增高，引发水肿。在激肽释放酶-激肽系统中，C1-INH的缺少或功能缺损会导致因子Ⅻ(FⅫa)的过度活化及激肽释放酶的活性提高，从而增加缓激肽的形成。缓释肽可引起毛细血管扩张、渗透性增强，导致血管内容物渗出形成局部水肿。这是引起遗传性血管性水肿的直接发病原因。

遗传性血管性水肿(hereditary angioedema，HAE)是一种罕见、严重的常染色体显性遗传病，发病率为1:10 000～1:50 000。其病因是患者血浆中C1酯酶抑制剂(C1esterase inhibitor，C1-INH)减少或功能缺损。典型临床表现为反复发作性、局限性、自限性皮肤及黏膜水肿。主要累及肢体、颜面、上呼吸道及胃肠道。其中上呼吸道黏膜水肿(upper airway angioedema，UAE)易导致呼吸道阻塞，可引发窒息而危及生命。在未得到及时诊断和恰当治疗的UAE引发的窒息病例中死亡率高达30％～50％。故HAE患者除水肿发作时需要急性治疗外，还需长期服药进行预防性治疗。

目前已经有多种从血浆中提取C1-INH的方法，这些方法大部分都包括至少一步沉淀和几步层析步骤。

Tel和Froger提供了一种从去冷沉淀血浆中提取C1酯酶抑制剂的工艺。去冷沉淀血浆经过DEAE离子交换层析后，再经过PEG沉淀和CM离子交换层析得到95％以上纯度的制品。总活性收率仅32.6％。

US-4915945描述了冷沉淀血浆经DEAE凝胶吸附后再经QAE凝胶吸附，洗脱液经硫酸铵沉淀后，沉淀复溶再经Phenyl-Sepharose疏水层析制备得到C1酯酶抑制剂。该法收率约20％，C1-INH纯度约90％。

WO-A2-01/46219提供了一种制备高比活性、高纯度C1酯酶抑制剂的方法。去冷沉淀血浆经过一次阴离子交换层析后进行PEG沉淀，上清液S/D病毒灭活后再进行二次离子交换层析，然后纳滤、透析冻干得到制品，所得到蛋白比活值大于6U/g。

Kumar描描述了通过3步层析制备高纯度C1酯酶抑制剂的方法。该方法以血浆为原料，依次经过DEAE离子交换层析、苯基疏水层析以及TMAE离子交换层析制备得到纯度98～99％的C1酯酶抑制剂。该法层析步骤多，生产操作复杂且成本较高。

然而上述方法均存在安全性不足和成本高的缺陷，因此开发安全性高并且成本较低的C1酯酶抑制剂是很有必要的。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种C1酯酶抑制剂及其制备方法，该方法以血浆提取人凝血酶原复合物的废料作为原料，通过PEG沉淀去除大部分杂蛋白后，再经过capto MMC离子交换层析纯化精制得到C1酯酶抑制剂，其具有生物安全性高和成本低的优势。

为实现上述目的，本发明的技术方案是包括有：以从血浆制备人凝血酶原复合物的废料为原料，采用PEG沉淀法纯化及capto MMC离子交换层析得到C1酯酶抑制剂。