[发明专利]一种C1酯酶抑制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种C1酯酶抑制剂的制备方法，其特征在于包括有：

以从血浆制备人凝血酶原复合物的废料为原料，采用PEG沉淀法纯化及capto MMC离子交换层析得到C1酯酶抑制剂；

具体包括以下步骤：

(1)收集DEAE Sephadex A50凝胶吸附的洗涤液，超滤后调节pH至6.4；

(2)向步骤(1)中的制得物添加PEG4000，搅拌，复测pH，用稀盐酸调节pH值至6.4；

(3)步骤(2)制得物继续搅拌5～30分钟后离心，离心条件为6000～20000g，离心温度12～26℃，收集上清液；

(4)步骤(3)所述上清液加入S/D溶液，搅拌均匀，温度控制在24～26℃，保温5～7小时后；

(5)步骤(4)所述蛋白液进行capto MMC离子交换层析，用洗涤缓冲液洗涤层析柱直至成基线，用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液；

(6)将步骤(5)所述洗脱液用30kD超滤膜超滤，加入透析液等体积超滤透析5～7次，得到C1酯酶抑制剂原液；

(7)用透析液稀配C1酯酶抑制剂原液至C1酯酶抑制剂效价60～70IU/ml，得到C1酯酶抑制剂；

所述的从血浆制备人凝血酶原复合物的废料为DEAE Sephadex A50凝胶吸附过程中经层析柱流出来的洗涤液；

所述的洗涤液的蛋白浓度3～6wt％；步骤(2)所述PEG4000质量分数为10～14％；

步骤(6)所述透析液包括2.9g/L枸橼酸钠、6.5g/L氯化钠、5～10g/L丙氨酸和10.0g/L甘氨酸。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)所述洗涤缓冲液包括2.94～5.88g/L的枸橼酸钠和3.2～4.09g/L氯化钠。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述洗脱缓冲液包括2.94～5.88g/L的枸橼酸钠和14.61～20.45g/L氯化钠。

4.根据权利要求1所述的一种高活性的C1酯酶抑制剂的制备方法，其特征在于，所述的C1酯酶抑制剂经过0.2μm滤芯除菌过滤分装，然后进行真空冷冻干燥；所述真空冷冻干燥包括以下步骤：

①药品室温入柜；

②板层温度2分钟内降至-6℃，保温120分钟；

③将板层温度在30分钟内降至-30℃，保温30分钟；

④将板层温度在20分钟内降至-45℃，保温480分钟；

⑤开始抽真空度至10Pa，保持10Pa±5Pa；

⑥将板层温度在300分钟内升至-30℃，保温300分钟；

⑦将板层600分钟升至0℃，保温900分钟；

⑧将板层120分钟升至10℃，保温120分钟；

⑨将板层180分钟升至30℃，保温480分钟；

⑩抽极限真空，保持30℃至真空合格；真空下压塞。