[发明专利]一种丹参花药的内参基因及其用途

说明书

本发明公开了一种丹参花药的内参基因，所述内参基因为Sm073914基因和/或Sm083165基因。本发明以Sm073914和/或Sm083165基因作为丹参花药qRT‑PCR的内参基因对目标基因的表达水平进行归一化，解决了丹参花药qRT‑PCR没有内参基因的现状。

技术领域

本发明具体涉及一种丹参花药的内参基因及其用途。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)隶属于唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia)多年生草本植物。主要分布在四川、山东、河南、陕西等地，是常见大宗中药材。《中华人民共和国药典》2020年版中规定，药材丹参为唇形科鼠尾草属丹参的干燥根及根茎，其主要成分为脂溶性的丹参酮类以及水溶性的酚酸类化合物。丹参具有改善血液循环、保护心血管、保护神经和抗癌等药理作用，不仅在中药开发和利用方面具有重要的价值，而且也可用于食品、饲料及天然产物提取，以获得其独特的功效。因此，对丹参花药发育调控机制的研究，需要进一步挖掘参与发育的功能基因，并研究基因的表达模式和生物学功能。

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是对目标基因表达定量应用最广泛的分子生物学方法，具有精确度高、灵敏性强、特异性强和重复性好等特点，也常用于植物学、医学、微生物学等众多领域的研究。但是qRT-PCR对目标基因表达量准确分析的前提是筛选出稳定表达的内参基因。理想的内参基因应该不受生长阶段、组织器官及实验处理条件的影响。然而，内参基因在不同植物以及不同实验条件下并不是恒定的，而且内参基因在不同植物、不同的组织中并不具有通用性。此外，关于丹参花药内参基因的研究还较为匮乏，虽然用于丹参的内参基因已有报道，然而经过实验验证并不适用于花药。因此，现有的内参基因并不能作为丹参花药qRT-PCR的内参基因。

目前，针对适宜用于丹参花药qRT-PCR研究的内参基因还未见报道，为研究丹参花药功能基因表达特性，得到表达稳定可靠的丹参花药的内参基因是目前迫切需要的。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种丹参花药的内参基因，所述内参基因为Sm073914基因和/或Sm083165基因。

进一步地，所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Sm083165基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种扩增前述内参基因的引物，所述Sm073914基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物；

所述Sm083165基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。

本发明最后提供了一种Sm073914基因和/或Sm083165基因作为内参基因在丹参花药基因检测中的用途。

进一步地，所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Sm083165基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步地，所述基因检测是检测丹参花药基因转录表达水平。

更进一步地，所述基因检测是实时荧光定量检测丹参花药基因转录表达水平。

更进一步地，所述基因检测使用的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物。

更进一步地，所述基因检测使用的引物还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。

本发明所述的丹参花药为四川丹参和/或山东丹参。