[发明专利]一种重组载体、转化体及其在五环三萜类化合物糖基化修饰中的应用

说明书

本发明公开了一种重组载体、转化体及其在五环三萜类化合物糖基化修饰中的应用，具体地，本发明的毕赤酵母重组载体和/或其转化体和/或重组载体组合物和/或转化体组合物和/或细胞表面共展示糖基转移酶和蔗糖合酶的重组毕赤酵母，用于五环三萜类化合物的糖基化修饰，具有重复利用率高，催化效率高，反应条件温和，高效，绿色安全等优点。

技术领域

本发明属于生物工程与技术领域，具体地，本发明涉及一种毕赤酵母重组载体和/或其转化体和/或重组载体组合物和/或转化体组合物和/或细胞表面共展示糖基转移酶和蔗糖合酶的重组毕赤酵母及其在五环三萜类化合物糖基化修饰中的应用。

背景技术

五环三萜类化合物是一类结构较为复杂的，具有抗炎、抗菌和抗肿瘤等多种生物活性的重要植物天然产物。其代表化合物有β-香树脂醇、齐墩果酸、甘草酸、甘草次酸、积雪草酸、熊果酸等。但大部分五环三萜化合物在水溶液中的溶解性差且高浓度时对正常细胞具有一定的毒性。因此作为新药开发对其进行改性是非常必要的。糖基化是对天然产物的一种主要修饰。糖基含有多个羟基，极性强，可以有效的调节天然产物的极性。例如甘草次酸(GA)与一种葡萄糖醛酸在3-OH处的糖基化呈现出比蔗糖高941倍的强甜味，并且由于更好的跨膜能力而提高了生物利用度。

相关技术中，对GA的改性可以以UDP-葡萄糖为糖供体生成3-O-葡萄糖基-甘草次酸(Glycyrrhetinic acid-3-O-β-glucose，GLMG)，GLMG和GA相比具有更强的水溶性，稳定性和分泌性，也可以降低糖苷配基毒副作用有更好的跨膜能力提高了生物利用度，但该生产过程存在耗时高，成本高，UDP-葡萄糖(UDPG)供体昂贵等问题。利用蔗糖合酶与糖基化反应偶联，从而通过消耗廉价的蔗糖回收UDP来提供UDP-葡萄糖，可以有效解决糖供体昂贵的问题。但是该体系目前仅在游离酶中实现，游离的糖基转移酶、蔗糖合酶不稳定，效率低，严重影响了甘草次酸糖苷衍生物在食品和医药行业的应用。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明旨在解决相关技术中的技术问题，为此，本发明实施例一方面提供了一种毕赤酵母重组载体、转化体及其组合物及其应用；本发明实施例另一方面还提供了一种细胞表面共展示糖基转移酶和蔗糖合酶的重组毕赤酵母及其构建方法和应用。本发明实施例具有高效专一及温和的酶催化反应特性，且又克服了游离酶的不足之处，呈现存储稳定性高，分离回收容易，可被多次重复使用，连续操作可控，工艺简便等优点，对于五环三萜类化合物糖基化修饰，进而提高其利用度具有重要意义。

本发明实施例提供了一种毕赤酵母重组载体，包括糖基转移酶UGT73F24m基因序列，所述糖基转移酶UGT73F24m基因序列如SEQ ID NO.1所示。