[发明专利]一种来源于海水珍珠的血管紧张素转化酶抑制多肽及其应用

说明书

本发明属于海洋生物小分子活性肽领域，具体涉及一种来源于海水珍珠的血管紧张素转化酶抑制多肽及其应用，其氨基酸序列为Lys‑Lys‑Cys‑His‑Phe‑Trp‑Pro‑Phe‑Pro‑Trp。本发明通过将合浦珠母贝所产无核珍珠粉碎，脱钙制备珍珠基质蛋白，酶解珍珠基质蛋白，将酶解物通过高效液相色谱分离纯化得到该小分子活性肽并进行活性验证。结果表明本发明的活性肽具有很好的ACE抑制活性，IC50值为4.17μM，可用于高血压疾病的保健和治疗，可用于保健品及生物医药制品的开发，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种从合浦珠母贝珍珠基质蛋白中分离纯化得到的血管紧张素转化酶抑制多肽，属于生物技术领域。

背景技术

血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)是一种广泛存在于哺乳动物组织中的二肽羧基肽酶，在人体内参与血压的调节。ACE可以水解血管紧张素Ⅰ将其末端的组氨酸亮氨酸去除，转化为血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ作用于动脉血管平滑肌，使其收缩引起血压迅速升高。因此血管紧张素转化酶抑制剂成为临床上重要的降血压药物，如开托普利、赖诺普利等。但此类化学合成降压药物往往要长期服用，毒副作用的累积效应不容忽视。食物来源的蛋白制备的ACE抑制肽具有生理活性高和毒副作用小的优点成为研究的热点。

珍珠，由95％的碳酸钙和5％的有机基质组成，其中有机基质包括基质蛋白、几丁质等多糖和极少量的脂类，基质蛋白是有机基质的主要成分。在中国古代，珍珠不仅用作装饰品或首饰，还是一味珍贵的中药材，《本草纲目》记载：珍珠无毒，镇心点目珍珠涂面，令人润泽好颜色，可坠痰，除面斑，止泻除小儿惊热，安魂魄止遗精白浊，解痘疗毒，令光泽洁白。并且可以将珍珠磨成珍珠粉直接内服，如中国古代武则天、慈禧、和珅具有内服珍珠粉并对健康有益的历史记载，在古埃及也有埃及艳后将珍珠溶解服用的故事，可见珍珠粉可以看作一种特殊的保健食品，是安全无毒有益的，只是在古代比较奢侈昂贵而只有少数人能享用。目前珍珠基质蛋白ACE抑制肽未见报道。

发明内容

本发明针对上述问题、现状和发展前景，提供一种来源于海水珍珠的血管紧张素酶抑制活性肽及应用，该活性肽具有ACE抑制活性，分子量小，活性高，易于分离纯化，可用于高血压相关疾病的保健及治疗，在生物医药领域有广阔的应用前景。

本发明为实现上述目的提供的技术方案为：

一种从海水珍珠中分离纯化的新型血管紧张素酶抑制活性肽，其氨基酸序列为Lys-Lys-Cys-His-Phe-Trp-Pro-Phe-Pro-Trp。

以合浦珠母贝珍珠为例，一种从合浦珠母贝珍珠基质蛋白中分离纯化的新型血管紧张素酶抑制活性肽，其制备方法包括以下步骤：

(1)珍珠基质蛋白的提取：将合浦珠母贝无核珍珠粉碎，收集珍珠粉，置于烧杯中，加入五倍体积的1.5M乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙，离心收集上清液透析，然后冷冻干燥获得珍珠基质蛋白。

(2)珍珠基质蛋白的酶解：取珍珠基质蛋白冻干粉加入胰蛋白酶(trypsin)进行酶解，胰蛋白酶的加入量为珍珠基质蛋白重量的5％，酶解体系的pH为8.0，反应温度为50℃，酶解时间为2小时，沸水浴灭活后离心收集上清液，抽滤后使用蛋白浓缩离心管进行离心超滤，截留分子量的规格为3KD，收集分子量小于3KD的滤过液，浓缩后冷冻干燥获得酶解好的珍珠基质蛋白多肽混合物。

(3)珍珠基质蛋白ACE抑制多肽的分离纯化：使用高效液相色谱对酶解好的珍珠基质蛋白多肽混合物进行纯化，色谱柱为C18，流动相A为含有0.1％三氟乙酸的去离子水，流动相B为含有0.1％三氟乙酸的乙腈，流速为1ml/min，紫外检测波长为280nm，收集保留时间为14min的样品，浓缩后冷冻干燥即得到序列为Lys-Lys-Cys-His-Phe-Trp-Pro-Phe-Pro-Trp的血管紧张素转化酶抑制多肽。

本发明提出的活性肽可以用于制备血管紧张素转化酶抑制剂、制备具有调节血压作用的药物或者制备保健品。