[发明专利]一种基于分子探针技术制备乳清蛋白-咖啡酸结合物的方法

权利要求书

1.一种咖啡酸-生物素小分子探针，其特征在于，所述小分子探针的结构如式1所示，

2.权利要求1所述咖啡酸-生物素小分子探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

S1：将式2所示化合物、式3所示化合物溶于有机溶剂A中；

室温下加入有机溶剂B、有机溶剂C，反应搅拌；将反应液加入到甲基叔丁基醚中析出中间产物A，用硅胶柱纯化，再用二氯甲烷和石油醚重结晶得到式4所示化合物；

优选的，甲基叔丁基醚与式2所示化合物的比例为54.1-57.1mL/g；

进一步优选的，甲基叔丁基醚与式2所示化合物的比例为55.6mL/g；

式2所示化合物为

式3所示化合物为

式4所示化合物为

S2：将式4所示化合物溶于二氯甲烷；冰浴下加入盐酸-甲醇溶液，反应搅拌；浓缩反应液得到式5所示化合物；式5所示化合物为

优选的，式4所示化合物在二氯甲烷中的浓度为62.5-65.5mg/mL；

进一步优选的，式4所示化合物在二氯甲烷中的浓度为64mg/mL；

S3：将式5所示化合物、式6所示化合物溶于有机溶剂A中；室温下加入有机溶剂B、有机溶剂C，反应搅拌；将反应液加入到甲基叔丁基醚中析出中间产物B；用硅胶柱纯化，再用二氯甲烷和乙酸乙酯重结晶得到式1示化合物；

式6示化合物为

式1示化合物为

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1中所述式2所示化合物与式3所示化合物的质量比为7.5：6.5-10.5：9.5，优选的，S1中所述式2所示化合物与式3所示化合物的质量比为9：8。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1、S3中，所述有机溶剂A为二甲基甲酰胺(DMF)，

所述式2所示化合物在有机溶剂A中的浓度为70.5-73.5mg/mL，优选的，所述式2所示化合物在有机溶剂A中的浓度为72mg/mL；

式5所示化合物在有机溶剂A中的浓度为42.5-45.5mg/mL，优选的，式5所示化合物在有机溶剂A中的浓度为44mg/mL；

式6所示化合物在有机溶剂A中的浓度为46.5-49.5mg/mL，优选的，式6所示化合物在有机溶剂A中的浓度为48mg/mL；

所述有机溶剂B为碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，

S1中有机溶剂B与式2所示化合物的质量比为1.7：1.5-4.7：4.5，优选的，S1中有机溶剂B与式2所示化合物的质量比为3.2：3；

S1中有机溶剂B与式3所示化合物的质量比为4.5：3.5-7.5：6.5，优选的，S1中有机溶剂B与式3所示化合物的质量比为6：5；

S3中有机溶剂B与式5所示化合物的质量比为3.3：4-6.3：7，优选的，S3中有机溶剂B与式5所示化合物的质量比为4.8：5.5；

S3中有机溶剂B与式6所示化合物的质量比为2.5：3.5-5.5：6.5，优选的，S3中有机溶剂B与式6所示化合物的质量比为4：5；

所述有机溶剂C为4-二甲氨基吡啶(DMAP)，

S1中有机溶剂C与式2所示化合物的质量为0.4：8.79-0.82：9.21，优选的，S1中有机溶剂C与式2所示化合物的质量为0.61：9；

S1中有机溶剂C与式2所示化合物的质量为0.4：7.79-0.82：8.21，优选的，S1中有机溶剂C与式2所示化合物的质量为0.61：8；

S3中有机溶剂C与式5所示化合物的质量比为0.4：10.79-0.82：11.21，优选的，S3中有机溶剂C与式5所示化合物的质量比为0.61：11

S3中有机溶剂C与式6所示化合物的质量比为0.4：11.79-0.82：12.21，优选的，S3中有机溶剂C与式6所示化合物的质量比为0.61：12。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1中，所述硅胶柱试剂体积比为二氯甲烷：甲醇＝20:1；S3中，所述硅胶柱试剂体积比为二氯甲烷：甲醇＝10：1。