[发明专利]细菌基因组DNA提取试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种细菌基因组DNA提取试剂盒，包括悬浮液、结合液、去蛋白液、漂洗液和洗脱液，

所述悬浮液包括第一Tris-EDTA缓冲液中1-2％的十二烷基肌氨酸钠；

所述结合液包括柠檬酸钠缓冲液中2-5M的GuHCl和20-60mM的尿素；

所述去蛋白液包括第一Tris-HCl缓冲液中2-3M的GuHCl，加入终浓度30-60％体积的乙醇；

所述漂洗液包括第二Tris-HCl缓冲液中加入终浓度75-80％体积的乙醇；

所述洗脱液包括第二Tris-EDTA缓冲液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，还包括DNA吸附柱和蛋白酶K。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，所述DNA吸附柱为硅基质膜吸附柱。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，所述第一Tris-EDTA缓冲液的pH为7.5～8.5，优选为8，包括20-100mM，优选25～50mM的Tris-HCl和10-20mM的EDTA。

5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，所述柠檬酸钠缓冲液的pH为5.0-6.0，优选5.0-5.5，浓度为20-60mM，优选为50mM。

6.根据权利要求1或2所述的试剂盒，所述第二Tris-EDTA缓冲液的pH为7.5～8.5，优选为8，包括5～20mM，优选10mM的Tris-HCl和0.1～10mM，优选1mM的EDTA。

7.使用权利要求1-6任一项的试剂盒提取细菌基因组DNA的方法，包括：

1)对细菌样本破碎细菌细胞、降解蛋白并释放细菌基因组DNA；

2)加入所述结合液进行孵育；

3)用乙醇沉淀DNA；

4)将所述沉淀DNA的液体转移至吸附柱中进行离心，去液相；

5)在所述吸附柱中加入所述去蛋白液和无水乙醇混合物进行离心，去液相；

6)所述吸附柱中加入所述漂洗液和无水乙醇混合物进行离心，去液相，优选重复1-2次，然后晾干；

7)从所述吸附柱洗脱DNA。

8.根据权利要求7所述的方法，在1)中，用所述悬浮液破碎革兰氏阴性菌的细胞壁，用溶菌酶破碎革兰氏阳性菌的细胞壁。

9.根据权利要求7或8所述的方法，在1)中，用蛋白酶K降解蛋白。

10.根据权利要求7或8所述的方法，在2)中，在56℃下孵育10～15min。