[发明专利]一种快速广谱检测细菌的试剂盒、制备方法及其检测方法

说明书

本发明公开了一种快速广谱检测细菌的试剂盒、制备方法及其检测方法，本发明采用聚乳酸‑羟基乙酸共聚物基近红外荧光纳米球和超顺磁性纳米球，联合生物正交反应，用于细菌感染的检测。与抗原抗体结合的方法相比，基于生物正交反应的病原菌检测能实现对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱和选择性检测，具有普适性；并且与传统的膜过滤或离心的分离策略相比，基于Fe₃O₄纳米颗粒的病原菌检测具有更省时、简单、方便、成本低等优点；与目前报道的基于可见光的荧光检测方法相比，基于近红外荧光纳米颗粒的病原体检测具有更强的抗干扰能力。

技术领域

本发明涉及生物检测的技术领域，具体而言，涉及一种快速广谱检测细菌的试剂盒、制备方法及其检测方法。

背景技术

细菌感染可以导致多种疾病，例如结核病，胃癌，食物中毒，尿路感染和伤口感染，败血症等。对人们生活影响很大，是导致人类死亡的主要原因之一。人体被细菌侵袭后是否发病，一方面与其自身免疫力有关，另一方面也取决于细菌致病性的强弱和数量的多少。一般来说，细菌类型不同，症状也会有所差异，数量越大，发病的可能性越大。因此，快速准确的检测病原菌具有重要意义。

传统的细菌检测方法比如平板培养法是目前临床上检测细菌的金标准，存在时间长的缺点，不能帮助早期诊断。还有应用广泛的生物化学鉴定法，可以鉴定细菌种类，但是耗时长，检测限高，分子和免疫分析技术比如PCR和ELISA等，容易实现自动化和高通量检测。缺点是检测过程干扰因素较多，并且成本较高。一些基于电化学等的生物传感器检测速度很快但是不能识别细菌类型。

基于传统检测方法的缺点，研究人员发展了很多其他的检测方法，比如，利用细菌分泌的酶活性，细菌引起的pH变化，利用细菌的表面物理性质如粗糙程度等以及利用抗生素进行检测，但是这些方法普遍面临着干扰因素多，广谱性差等问题。

如果没有准确的微生物分析结果，医生通常会做最坏情况的假设，即使用广谱抗生素。但这种做法极有可能导致不适当和不必要的治疗，破坏病人的微生物组成，并出现细菌多药耐药的情况。因此，快速准确的微生物分析技术对于正确管理细菌感染和对抗多药耐药细菌至关重要。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种快速广谱检测细菌的试剂盒，本发明的第二个目的在于提供一种快速广谱检测细菌的试剂盒的制备方法，本发明的第三个目的在于提供一种非诊断目的的快速广谱检测细菌的方法；以达到快速、灵敏、方便地检测细菌的目的。

本发明的实施例通过以下技术方案实现：

一种快速广谱检测细菌的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

步骤C1，收集红细胞膜，形成红细胞膜溶液B；

步骤C2，通过利用吲哚菁绿、聚乳酸-羟基乙酸共聚物与红细胞膜溶液B混合，再通过离心制得近红外荧光纳米球；

步骤C3，制备Fe₃O₄水溶液，加入红细胞膜溶液B，分离制得超顺磁性纳米球。

在本发明的一实施例中，步骤C1包括：

采集无菌血，去除血浆、白细胞和血小板后收集得到红细胞沉淀，用磷酸缓冲盐溶液洗涤红细胞沉淀至上清液澄清，然后悬浮在磷酸缓冲盐溶液中静置，等待红细胞破裂，再离心、收集红细胞膜沉淀，形成红细胞膜溶液B。

在本发明的一实施例中，将吲哚菁绿溶解于二甲基亚砜形成溶液D，将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解于丙酮形成溶液E，将溶液D和溶液E混合形成溶液F；

将溶液F滴入RO水中形成溶液G，搅拌溶液G使二甲基亚砜和丙酮挥发形成溶液H，将溶液H透析得到溶液I，将溶液I与步骤C1得到的红细胞膜溶液B混合得到混合物J，将混合物J用冰浴处理，获得红细胞膜纳米球溶液K；