[发明专利]在体外侦测样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法

说明书

本发明公开了一种在体外侦测生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法。特别是涉及在体外使用一搭载包裹具有碱基突出区段的分子信目标脂质复合体纳米粒的生物芯片侦测生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法。其次，本发明所提供的方法对于单点变异的基因分子具有非常好的辨识专一性和信号灵敏度，可以广泛应用在检测判断早期病变的生物样本。

本申请是申请日为2018年02月01日、申请号为201810144554.7、发明名称为“在体外侦测样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种在体外侦测生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法，更具体涉及利用一种具有碱基突出区段的分子信标应用在体外侦测生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸，特别是侦测单点变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸。

背景技术

传统的生物分子芯片和连锁聚合酶反应法等分析技术通常缺乏辨识生物样本中仅具有微小结构变化差异的生物信息分子的特性，对于检测判断生物样本是否是早期病变的生物样本常产生假阴性的问题，而无法提供正确可信赖的检测结果。

其次，各种生物样本中的mRNA和microRNA虽然可以通过qRT-PCR、微阵列和RNA测序技术来实现定量测定。通过收集生物样本中所有细胞分泌的外泌体来定量其中的目标RNA，然而癌细胞样本分泌的外泌体只占所有外泌体的一小部分，所以其检测灵敏度不高。更无法有效地用来检测变异的基因，信息核醣核酸或是微核醣核酸等RNA分子，另外，这些方法需要繁琐的样品制备和检测步骤，价格昂贵。

美国专利公开号US 20140094383公开了一种生物芯片，然而该生物芯片并没有解决能侦测分析变异的基因分子的问题，因而限制了其使用的领域。

基于前述的原因，涉及变异的基因分子的检测应用领域亟需新的检测方法和相关的芯片设计以克服解决先前技术所遭遇的困难和问题，因此，本发明的技术方案是为了突破先前技术的限制所做的新颖设计。

发明内容

基于以上的背景技术说明，本发明的第一目的在于提供一种在体外侦测生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸(mRNAs)或微核醣核酸(microRNAs)的方法。所述的方法特别是在体外使用具有碱基突出区段(overhang section)设计的分子信标(molecularbeacons)侦测生物样本中所含有的单点变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸等基因分子，上述的具有碱基突出区段的分子信标(Oh-MBs)是新颖结构设计的人工合成的寡核酸(polynucleotide)，其对于生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸具有优异的辨识专一性和灵敏性，因此，本发明所述的方法能广泛应用在体外进行各种生物样本中所含有的变异的基因、信息核醣核酸(mRNAs)或微核醣核酸(microRNAs)的侦测。

上述第一目的是通过以下的技术方案来实现的。

于代表技术方案，所述的在体外侦测生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法，其特征在于该方法包括下述步骤。

提供生物样本，该生物样本中含有细胞、肿瘤循环细胞(CTCs)和外泌体(EVs)；和使用装配具有碱基突出区段的分子信标(Oh-MBs)的分析器在体外测量上述的生物样本和该具有碱基突出区段的分子信标进行交互作用所产生的荧光信号，借此侦测存在于上述生物样本中的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸，其中上述的具有碱基突出区段的分子信标是人工合成的寡核酸(polynucleotide)，该寡核酸是由至少包含9个碱基对的骨干区(stem)、至少包含4个碱基的回路(loop)、至少包含5个互补碱基的碱基突出区段，该互补碱基是互补于上述的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸、荧光分子基团和荧光淬灭基团所构成，其中上述的碱基突出区段的最后一个互补碱基或上述骨干区的第一个碱基是对应于上述的变异的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的单点变异的碱基。