[发明专利]两种厚壳贻贝金属硫蛋白及其编码基因在海域重金属污染监测中的应用

说明书

本发明提供了两种厚壳贻贝金属硫蛋白及其编码基因及其在监测海域重金属污染中的应用，属于功能基因技术领域。本发明鉴定得到厚壳贻贝金属硫蛋白基因McMT‑10和McMT‑20。以这两种基因序列为模板设计了两对高特异性荧光定量PCR引物用以检测其在重金属污染环境中的表达量变化。结果显示McMT‑10和McMT‑20对重金属污染高度敏感，根据其表达量的变化可以检测低剂量的重金属污染，同时可以反应污染的严重程度。

技术领域

本发明属于功能基因技术领域，具体涉及两种厚壳贻贝金属硫蛋白及其编码基因及其在监测海域重金属污染中的应用。

背景技术

世界工业化进程的加快不可避免导致重金属的排放，并通过地下水汇集入河流中，最终流入海洋。近岸海域重金属污染是当前全世界沿海国家所面临的普遍性环境问题。

目前，重金属污染检测的常用方法是采集水样，然后通过生化方法如原子吸收分光光度法对其中的重金属元素如铜、锌、镉等进行鉴定。此方法程序繁琐、工作量大且反应迟钝，往往只有污染程度较高时才能予以检测到，缺乏时效性。利用海洋指示生物中表达的蛋白作为生物标志物进行重金属污染的监控是近年来世界沿海国家普遍兴起的监控方法，能在一定程度反映出环境污染的综合生物学效应，是环境监测行之有效的手段之一。然而我国拥有绵长的海岸线，选择一种标准的海洋指示生物及其能够表达准确指示重金属污染的蛋白标志物是一种亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种厚壳贻贝金属硫蛋白及其编码基因，其表达水平对重金属污染高度敏感，能够用于准确监测海域重金属污染中。

本发明提供了一种厚壳贻贝金属硫蛋白，包括McMT-10和McMT-20；所述McMT-10的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述McMT-20的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明提供了一种编码所述厚壳贻贝金属硫蛋白的基因，包括McMT-10和McMT-20；所述McMT-10的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述McMT-20的核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示。

本发明提供了一种所述基因的扩增引物，包括McMT-10扩增引物和McMT-20扩增引物；

所述McMT-10扩增引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示的反向引物；

所述McMT-20扩增引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示的反向引物。

本发明提供了一种监控海洋重金属污染的试剂盒，所述试剂盒包括所述扩增引物、内参引物和荧光定量PCR检测扩增试剂；

所述内参引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示的GAPDH基因正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示的GAPDH基因反向引物。

优选的，所述扩增试剂还包括反转录试剂。

本发明提供了所述厚壳贻贝金属硫蛋白、所述基因、所述引物或所述试剂盒在监测海域重金属污染中的应用。

优选的，所述重金属包括以下一种或几种：铜、锌和镉。

本发明提供了一种监控海洋重金属污染的方法，包括以下步骤：

1)采集海岸线厚壳贻贝，提取厚壳贻贝的RNA；

2)以步骤1)中所述RNA为模板进行反转录，得到cDNA；