[发明专利]一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，涉及一种蜜蜂抗菌肽及其基因和应用。其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。通过高密度液体发酵进行高效表达，制备出作为饲料添加剂的蜜蜂抗菌肽AP2，代替饲用抗生素，防治动物疾病，克服抗生素滥用带来的不良后果，并降低生产成本。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，涉及一种蜜蜂抗菌肽及其基因和应用。

背景技术

抗生素在治疗疾病、预防感染、促进动物生长、改善动物健康状况等方面发挥了十分积极的作用，但其危害也被各国所重视，在饲料及养殖中禁用抗生素的呼声越来越高。抗生素在环境中的污染，会使一些致病菌产生抗药性，甚至造成超级病菌的产生，这会对人类社会产生巨大的危害和风险。因此，抗生素的替代成为国内外急待解决的一个重大问题。

抗微生物肽(Antimicrobial Peptides,AMPs)是生物体免疫系统在受到异源刺激时，诱导产生的一类防御性生物活性肽，是机体非特异性天然防御系统的重要组成部分，广泛存在于自然界各种生物以及人体内。

抗菌肽为一种多肽类物质，对动物机体没有毒害作用，易被降解，不会对环境造成污染、残留，可作为畜禽饲料添加剂取代或部分取代目前饲喂动物所用的抗生素，减少抗生素对动物体的危害。

蜜蜂属于膜翅目昆虫，没有严格意义上的免疫应答机制，当受到外界致病菌的侵入时，其血淋巴内即会产生抗菌肽，用于抵御疾病的发生，属于非特异性免疫。

通过现代生物技术方法，工业化生产对病原菌具有专一性或特异性的抗菌肽产品，是开发饲用抗生素替代产品的一条重要而有效的途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种蜜蜂抗菌肽AP2。

本发明的另一目的是提供编码上述蜜蜂抗菌肽AP2的基因Kap。

本发明的另一目的是提供包含编码上述蜜蜂抗菌肽AP2基因Kap的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述蜜蜂抗菌肽AP2基因Kap的重组菌株。

本发明的另一目的是提供制备上述蜜蜂抗菌肽AP2的方法。

本发明的另一目的是提供上述蜜蜂抗菌肽AP2的应用。

本发明的来源于蜜蜂的抗菌肽AP2的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示：

RVRRPVYIPQPRPPHPRL

该抗菌肽共由18个氨基酸残基组成，分子量为2235Da。

本发明的编码上述蜜蜂抗菌肽AP2的基因Kap的序列如SEQ ID NO:2所示：

5’-ATGAGGGTAAGACGACCAGTCTATATACCTCAGCCCCGCCCTCCGCACCCACGGCTATGA-3’

该基因进行毕赤酵母密码子偏好优化，并且在5’及3’端分别加上EcoR I及Not I酶切位点后，合成后的基因序列如SEQ ID NO:3所示：

5’-GAATTCATGAGGGTAAGACGACCAGTCTATATACCTCAGCCCCGCCCTCCGCACCCACGGCTATGAGCGGCCGC-3’。

本发明提供了包含上述蜜蜂抗菌肽基因Kap的重组载体，载体优选为pPICZαA，将Kap采用EcoR I和Not I进行双酶切，然后插入到经同样双酶切得到的pPICZαA载体中，使该核苷酸序列位于AOX1启动子的下游并受其调控，优选得到重组载体Kap-pPICZαA。

本发明还提供了包含上述重组载体Kap-pPICZαA的重组菌株，表达宿主优选为毕赤酵母X33。