[发明专利]高效促进丹参酮积累的基因SmCMT3及其用途

说明书

本发明公开了一种促进丹参酮积累的基因SmCMT3，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述。本发明还同时公开了基因SmCMT3促进丹参酮积累的应用，通过基因表达分析发现过表达SmCMT3极显著提高了紫草酸、丹酚酸B、丹参酮I和丹参酮IIA的含量。

技术领域

本发明属于生物领域，特别涉及一种正向调控丹参酮合成的SmCMT3基因及其功能研究。

背景技术

CMT3是植物特有的DNA甲基转移酶，负责CHG和CHH基因位点的DNA甲基化修饰。SmCMT3基因的过表达显著提高了SmHMGR和SmKSL基因表达和丹参酮合成。但是促进效果仍然有待改善。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可以大幅促进丹参酮积累的SmCMT3基因及其用途。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种促进丹参酮积累的SmCMT3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述。

本发明还同时提供了上述SmCMT3的用途，促进丹参酮积累。

作为本发明的SmCMT3的用途的改进：促进紫草酸、丹酚酸B、丹参酮I和丹参酮IIA的积累。

本发明采用基因过表达的方法研究了SmCMT3对丹参酮积累的调控作用，结果发现SmCMT3可以将丹参酮I的含量提高3.31倍，丹参酮IIA的含量提高3.80倍。

本发明具有如下优势：

1、SmCMT3促进丹参酮I积累，提高3.31倍；

2、SmCMT3促进丹参酮II积累，提高3.80倍。

综上所述，本发明利用基因过表达的方法发现了一个可以更加显著促进丹参酮I和丹参酮IIA积累的SmCMT3。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1SmCMT3基因的cDNA扩增电泳图；

图2SmCMT3过表达丹参毛状根株系图；

图3SmCMT3转基因毛状根和野生丹参毛状根的次生代谢物含量图(图A是酚酸类成分，图B是丹参酮类成分；CA为咖啡酸；RA为迷迭香酸；LA为紫草酸；SAB为丹酚酸B；T-I为丹参酮I；T-IIA为丹参酮IIA)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。

实验材料

1.1植物材料

以MS液体培养基中继代培养和鉴定成功的SmCMT3转基因毛状根和对照组(野生型毛状根和过表达空载体毛状根)为材料，称取0.20g，分别转进含有50mL的MS无菌液体培养基中，25℃，110rpm/min震荡暗培养30d采样。

1.2菌株、载体及引物

菌株：大肠杆菌DH5α和发根农杆菌ATCC15834

载体：pMD19-T；中间载体pGP-B2E；过表达载体pK7WG2R。

引物：

实施例1基因的克隆及分析

1、RNA的提取及cDNA的获得

(1)RNA的提取参照多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(DP441)说明书进行；