[发明专利]一种DNA文库构建试剂盒、文库构建方法和应用

权利要求书

1.一种DNA文库构建试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括P7接头和P5接头；

所述P7接头由反向互补的第一链和第二链组成，所述第一链5’端具有修饰基团，所述修饰基团包括磷酸基团、羟基或腺苷，所述第一链3’端经封闭修饰，所述封闭修饰包括C6氨基修饰、C12氨基修饰、双脱氧修饰或spacer修饰；

所述第二链的3’端经封闭修饰，所述封闭修饰包括双脱氧修饰；

所述P5接头由单链组成，P5接头的5’末端修饰有羟基基团，3’末端修饰有羟基基团，且3’末端两个碱基之间包含至少一个硫代修饰。

2.根据权利要求1所述的DNA文库构建试剂盒，其特征在于，所述P7接头的第一链的核酸序列包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ IDNO.6或SEQ ID NO.7所示的序列；

优选地，所述P7接头的第二链的dT碱基全部替换成为dU碱基；

优选地，所述P7接头的第二链的序列由核糖核酸组成；

优选地，所述P7接头的第二链的核酸序列包括SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9或SEQ IDNO.11所示的序列。

3.根据权利要求1或2所述的DNA文库构建试剂盒，其特征在于，所述P5接头的核酸序列包括SEQ ID NO.10所示的序列。

4.根据权利要求1-3任一项所述的DNA文库构建试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶组合物和/或缓冲液；

优选地，所述酶组合物包括DNA打断酶、末端修复酶、PCR扩增酶或连接酶中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述缓冲液包括末端修复缓冲液和/或连接缓冲液。

5.根据权利要求4所述的DNA文库构建试剂盒，其特征在于，所述连接酶包括T4 DNA连接酶、T4 DNA连接酶突变体或T7 DNA连接酶。

6.一种DNA文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：

采用如权利要求1-5任一项所述的DNA文库构建试剂盒进行文库构建。

7.根据权利要求6所述的DNA文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)对基因组DNA进行处理，得到片段化基因组DNA，并对片段化基因组DNA进行DNA末端修复，纯化产物，得到具有特定末端结构的片段化基因组DNA；

(2)使用DNA连接酶将P7接头连接至具有特定末端结构的片段化基因组DNA的3’端；

使用酶将P5接头连接至具有特定末端结构的片段化基因组DNA的5’端；

(3)纯化连接产物，并对连接产物进行PCR扩增，得到所述DNA文库。

8.根据权利要求7所述的DNA文库构建方法，其特征在于，所述纯化包括利用磁珠进行纯化；

优选地，所述P5接头的连接所使用的酶包括RNase H酶、UDG酶、Endo Ⅷ酶、taq聚合酶、A家族高保真聚合酶、B家族聚合酶、taq DNA连接酶或E.coli DNA连接酶中的任意一种或至少两种的组合。

9.根据权利要求6-8任一项所述的DNA文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)对基因组DNA进行处理，得到片段化基因组DNA，并对片段化基因组DNA进行DNA末端修复，利用磁珠纯化产物，得到具有特定末端结构的片段化基因组DNA；

(2)使用DNA连接酶将P7接头连接至具有特定末端结构的片段化基因组DNA的3’端；

使用酶将P5接头连接至具有特定末端结构的片段化基因组DNA的5’端；

(3)利用磁珠纯化连接产物，并对连接产物进行PCR扩增，利用磁珠纯化扩增产物，得到所述DNA文库。

10.一种如权利要求1-5任一项所述的DNA文库构建试剂盒在构建DNA文库中的应用。