[发明专利]检测非洲猪瘟病毒的双靶标组合、引物组合、试剂、试剂盒及方法和应用

权利要求书

1.一种检测非洲猪瘟病毒的双靶标组合，其特征在于，所述双靶标组合为非洲猪瘟病毒的B646L基因和P1192R基因。

2.一种检测非洲猪瘟病毒的引物组合，其特征在于，所述引物组合特异性的基于RT-LAMP法检测权利要求1所述非洲猪瘟病毒的B646L基因和P1192R基因。

3.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的引物组合，其特征在于，所述引物组合为用于扩增B646L基因的第一引物组和用于扩增P1192R基因的第二引物组；

所述第一引物组由第一外引物对、第一内引物对和第一环引物对组成；所述第二引物组由第二外引物对、第二内引物对和第二环引物对组成；

所述第一外引物对如下(a1)或(a2)：

(a1)如SEQ ID NO.1～2所示的单链DNA分子；

(a2)将(a1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；

所述第一内引物对为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.3～4所示的单链DNA分子；

(b2)将(b1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；

所述第一环引物对为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.5～6所示的单链DNA分子；

(c2)将(c1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；

所述第二外引物对为如下(d1)或(d2)：

(d1)如SEQ ID NO.7～8所示的单链DNA分子；

(d2)将(d1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；

所述第二内引物对为如下(e1)或(e2)：

(e1)如SEQ ID NO.9～10所示的单链DNA分子；

(e2)将(e1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；

所述第二环引物对为如下(f1)或(f2)：

(f1)如SEQ ID NO.11～12所示的单链DNA分子；

(f2)将(f1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子。

4.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂，其特征在于，所述试剂包含权利要求3中所述第一外引物对、第一内引物对、第二外引物对和第二内引物对。

5.根据权利要求4所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂，其特征在于，所述试剂还包含权利要求3中所述第一环引物对和第二环引物对。

6.根据权利要求5所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂，其特征在于，所述第一外引物对、第一内引物对和第一环引物对的摩尔比为8:1:4，所述第二外引物对、第二内引物对和第二环引物对的摩尔比为8:1:4，每对引物对中上下游引物的摩尔比为1:1。

7.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求4～5中任一项所述试剂。

8.一种非疾病诊断检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，包括：

对待测样本进行预处理的步骤；

对预处理得到的样本采用权利要求3所述引物组合进行RT-LAMP扩增反应的步骤；以及

对扩增产物进行分析的步骤。

9.根据权利要求8所述的一种非疾病诊断检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，所述RT-LAMP扩增反应条件为：65℃条件下加热40分钟。

10.权利要求3所述引物组合或权利要求4～5中任一项所述试剂或权利要求7所述试剂盒在如下(g1)或(g2)或(g3)中的应用：

(g1)检测或辅助检测非洲猪瘟病毒；

(g2)检测或辅助检测待测样本是否含非洲猪瘟病毒；

(g3)检测或辅助检测待测样本中非洲猪瘟病毒的含量。