[发明专利]一种乳脂质体的构建及其在巨噬细胞免疫活性调节中的应用

说明书

一种乳脂质体的构建及其在巨噬细胞免疫活性调节中的应用，通过抑制清道夫受体SRA1的活性抑制了由LPS（脂多糖）引发炎症的经典通路NF‑κB信号通路中NF‑κB二聚体入核实现对促炎症因子的转录抑制，从而抑制炎症反应。以脱脂酪乳中提取的乳极性脂质为原料，制备成空白乳脂质体，建立了LPS诱导的巨噬细胞炎症模型，乳脂质体可以抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应；通过对NF‑κB通路核内p50、p65蛋白表达量的测定，发现乳脂质体是通过抑制LPS引发炎症的经典通路NF‑κB信号通路中NF‑κB二聚体入核实现对促炎症因子的转录抑制，从而抑制炎症反应；乳脂质体抑制清道夫受体SRA1的表达，从而抑制细胞对LPS的应答，可应用于制备提高免疫活性的药品。

技术领域

本发明涉及巨噬细胞免疫调节领域，具体涉及一种乳脂质体的构建及其在巨噬细胞免疫活性调节中的应用。

背景技术

巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要分化细胞，它包括骨髓单核细胞、前体单核细胞、外围单核细胞和巨噬细胞。巨噬细胞可以通过调节自身的生物活性，以应对环境的刺激，如可溶因子的作用，与外来粒子或细胞的接触等。巨噬细胞增强生物活性的现象，如杀菌或破坏肿瘤作用被称为巨噬细胞的激活。巨噬细胞被脂多糖（lipoplysaccharides,LPS）或其它细胞因子等刺激后激活，会分化成典型的M1型细胞，分泌大量细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF-α，激活自然杀伤细胞，促进Th1细胞的分化）、白细胞介素1β（IL-1β，激活血管内皮细胞和淋巴细胞，促进局部炎症反应）、白细胞介素6（IL-6，激活淋巴细胞，增加抗体产量）、白细胞介素8（IL-8，一种趋化因子，主要趋化中性粒细胞），启动炎症免疫反应，进而清除病原体或抵抗肿瘤，同时激活机体特异性免疫应答。然而，巨噬细胞的过度免疫反应则会产生损害作用，促炎性细胞因子的过量持续的活化会导致慢性炎症的产生，过度活化的巨噬细胞可转化为抑制性细胞，通过分泌抑制性细胞因子，抑制免疫细胞的活化和增殖。所以巨噬细胞的活化及程度的调节对机体防御至关重要。模式识别受体，即能够识别病原体相关分子模式的成分。巨噬细胞表达的模式识别受体，主要包括Toll样受体、清道夫受体、甘露糖受体以及磷酯酰丝氨酸受体。清道夫受体SR-A是一种三聚体形式的膜糖蛋白，由一个半胱氨酸连接的二聚体和一个非共价结合的单体组成，包括SRAI、Ⅱ和胶原样巨噬细胞受体三种类型。SRA主要存在干不同组织和器官的巨噬细胞，SRAI的表达是巨噬细胞分化成熟的标志之一。SRA在宿主防御中起着重要作用，对LPS的清除和感染原的吞噬等。

一些药物可以起到调节巨噬细胞免疫活性的作用。当药物以可溶的形式注入人体后，只有一小部分能够到达巨噬细胞，经过载体系统的发展，目前脂质体已经广泛应用于将药物载体，帮助其转移到巨噬细胞中。脂质体与巨噬细胞的复杂相互作用大致包括以下步骤：稳定吸附在细胞表面，完整囊泡的细胞摄入，溶酶体降解脂质体和药物。脂质体与巨噬细胞的结合程度和被巨噬细胞摄入的程度取决于脂质体的组成、类型、大小和表面电性等。带负电荷的脂质体与中性脂质体相比，可以更有效地结合并传递信息；小脂质体比大的脂质体传递药物更有效，它们更容易被内化；最优的脂质体是表面带负电荷、直径大小为50-100 nm。构成脂质体的极性脂质中含带负电荷的磷脂，如磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油将极大的增强与巨噬细胞的结合和吞噬作用。

乳脂质体，是利用乳制品中提取的极性脂质配合一定比例的胆固醇制成的脂质体。现有研究通过比较以乳脂肪球膜中极性脂质和大豆磷脂为原料制备的脂质体的结构与性能，发现以乳脂肪球膜中极性脂质为原料制备的脂质体具有明显的较高的相变温度、较厚的膜和较低的膜渗透率。因为乳脂肪球膜极性脂质和大豆磷脂相比，前者含有较高水平的神经鞘磷脂和更高水平的脂肪酸饱和度，而神经鞘磷脂和磷脂酰胆碱相比有更加结构化的凝胶相，饱和度高的脂肪酸更不易被氧化。除此以外，对乳极性脂质体和大豆磷脂脂质体分散的相对稳定性的调查发现，在不同pH、储存温度等条件下，乳极性脂质体比大豆脂质体更稳定。