[发明专利]D-赖氨酸衍生物构筑的细菌细胞壁新生肽聚糖的生物发光检测体系及应用方法

权利要求书

1.一种D-赖氨酸衍生物构筑的细菌细胞壁新生肽聚糖的生物发光检测体系，其特征在于：体系包括D-荧光素衍生物和D-赖氨酸衍生物的混合物。

2.根据权利要求1所述的D-赖氨酸衍生物构筑的细菌细胞壁新生肽聚糖的生物发光检测体系，其特征在于：所述D-荧光素衍生物和D-赖氨酸衍生物的比例范围为1:1～20。

3.一种权利要求1所述体系中的D-赖氨酸衍生物，其特征在于结构式为：

4.一种权利要求3所述D-赖氨酸衍生物的制备方法，其特征在于步骤如下：

步骤1：将4-叠氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸置于二氯甲烷中，室温下逐滴滴加草酰氯，加入催化量的DMF，室温搅拌1～12h，蒸干得到粗品4-叠氮-2,3,5,6-四氟苯甲酰；

所述4-叠氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸与草酰氯摩尔比1:2；

步骤2：将粗品4-叠氮-2,3,5,6-四氟苯甲酰氯溶解于干燥的四氢呋喃中，并将其滴加至到N-(叔丁氧羰基)-D-赖氨酸、碳酸氢钾水溶液中；室温搅拌过夜，浓缩以去除四氢呋喃；

所述4-叠氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸与N-(叔丁氧羰基)-D-赖氨酸摩尔比1:2，4-叠氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸与碳酸氢钾摩尔比1:2-5；

步骤3：柱层析分离步骤2得到的中间体，将其溶于少量乙酸乙酯中，加入饱和氯化氢乙酸乙酯溶液脱Boc，此时有白色固体析出，过滤收集白色固体得到D-赖氨酸衍生物DAz。

5.一种权利要求1所述体系中的D-荧光素衍生物，其特征在于：所述D-荧光素衍生物结构式为：

6.一种权利要求5所述D-荧光素衍生物的制备方法，其特征在于步骤如下：

步骤1)：将2-二苯基膦苯甲酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶的混合物溶解在干燥的二氯甲烷中，室温下搅拌30分钟；将化合物2-氰基-6-羟基苯并噻唑加入反应液中，室温搅拌0～12h；薄层色谱监测反应，柱层析分离得到中间体；

步骤2)：将中间化合物溶解于二氯甲烷/甲醇溶液中，加入溶于超纯水/甲醇的D-半胱氨酸盐酸盐和碳酸钾混合物溶液，室温反应0～1h分钟；加入盐酸水溶液至pH值为2-3，将沉淀物过滤掉并用冰水冲洗，柱层析分离得到白色D-荧光素衍生物TL-PDC。

7.一种权利要求1所述D-赖氨酸衍生物构筑的细菌细胞壁新生肽聚糖的生物发光检测体系的应用方法，其特征在于步骤如下：用于检测细菌细胞壁中的新生肽聚糖，以及在小鼠体内对细菌进行生物发光检测。