[发明专利]检测脓毒症病原体的引物组合物、及其核酸检测试剂盒、检测方法

说明书

本发明公开了检测脓毒症病原体的引物组合物、及其核酸检测试剂盒、检测方法。其中，本发明公开了检测脓毒症病原体的引物组合物，其包括金黄色葡萄球菌引物组、肺炎克雷伯菌引物组、大肠埃希氏菌引物组、粪肠球菌引物组、鲍曼不动杆菌引物组、铜绿假单胞菌引物组、嗜麦芽窄食单胞菌引物组、肺炎链球菌引物组、脑膜炎奈瑟菌引物组、曲霉菌引物组、阴沟肠杆菌引物组和B族链球菌引物组中的至少一组。本发明提供的检测脓毒症病原体的引物组、包含所述引物组的核酸检测试剂盒及检测方法，可快速、准确地检测各种脓毒症病原体，以弥补现有针对脓毒症病原体检测技术存在的费时耗力的缺陷，提高检测灵敏度和特异性，降低劳动强度，缩短检测周期。

技术领域

本发明涉及病原体的检测和诊断技术领域，具体涉及检测脓毒症病原体的引物组合物、及其核酸检测试剂盒、检测方法。

背景技术

脓毒症可以由任何部位的感染引起，临床上常见于肺炎、腹膜炎、胆管炎、泌尿系统感染、蜂窝织炎、脑膜炎、脓肿等，指各种细菌或真菌进入血液循环，大量繁殖并产生毒素，诱发机体产生的全身炎症反应综合症。脓毒症是急危重症医学面临的重要临床问题，全球每年脓毒症患病人数超过1900万，其中有600万患者死亡，病死率超过1/4，存活的患者中约有300万人存在认知功能障碍。早期识别与恰当处理对改善脓毒症患者的预后很关键。其病原微生物包括细菌、真菌、病毒及寄生虫等，又以肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、曲霉菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、脑膜炎奈瑟菌、B族链球菌最为常见。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是成人及儿童血流感染的重要细菌之一，其感染也是脓毒症患儿入住重症监护室的主要原因，2012年中国15所医院送检的血标本培养监测结果显示，在共分离得到的8490菌株中，金黄色葡萄球菌占7.2％，居第5位，其发病率及病死率极高，快速确诊及精准治疗能够显著改善金黄色葡萄球菌脓毒症患儿预后。

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，也称为大肠杆菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。大肠埃希氏菌是动物肠道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定条件下引起疾病。大肠埃希氏菌的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃肠道感染以外，还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等。

肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae)常见的肺部感染后导致呼吸困难，甚至呼吸衰竭一系列病理反应，最后多脏器衰竭死亡的病例也不难见到。肺炎克雷伯杆菌肺炎时细菌生长繁殖快渗出液枯稠，引起肺泡壁和肺组织坏死、液化及胸膜受累。临床表现为：突然起病、寒战、高热、咳喉、咯痰、胸痛、甚至出现肺性脑病。若不及时治疗，病变可很快扩展，最后致脓毒症，多脏器衰竭等，肺炎克雷伯菌引起的医院感染率近期逐年增高，且多耐药性菌株的不断增加常导致临床抗菌药物治疗的失败和病程迁延。

粪肠球菌(Enterococcus faecalis)可引起医源感染，最常见为尿道感染(大部分与尿道器械操作、导尿等有关)。其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)为非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界，该菌是医院感染的重要病原菌，主要引起呼吸道感染，也可引发脓毒血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎、手术部位感染、呼吸机相关性肺炎等。鲍曼不动杆菌已经成为医院感染的主要来源，尤其是重症监护室。该病菌因为抗生素的滥用，导致鲍曼不动杆菌产生抗药性，目前对抗多重抗药性鲍曼不动杆菌的方法只有用后线抗生素如老虎霉素。

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是引起医院内感染常见的条件致病菌之一，具有检出率高、耐药性强、致死率高等特点，是呼吸系统常见的耐药菌之一，更易导致全身炎症反应综合征、脓毒症和多脏器功能衰竭。